The object of research, development or design (in Russian) : TBSV, N. benthamiana, CRISPR/Cas13

The object of research, development or design (in Kazakh) : TBSV, N. benthamiana, CRISPR/Cas13

Aim of work (in Russian) : Целью проекта является выяснение функциональных свойств супрессора РНК-интерференции (РНКи) – P19 в системе редактирования генов CRISPR/Cas13. Впервые будет использован мутант P19 белка с уменьшенной экспрессией. Это позволит провести сравнительный анализ дозо-зависимого влияния экспрессии Р19 на эффективность CRISPR.

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның мақсаты CRISPR/Cas13 гендер өңдеу механизмінде РНҚ-интерференцияны (РНҚи) басатын Р19 супрессорының функционалдық қасиеттерін анықтау болып табылады. Алғаш рет P19 экспрессиясының деңгейі төмен вирустық мутант қолданылады. Бұл CRISPR тиімділігіне мөлшерге тәуелді P19 экспрессиясының әсерін салыстырмалы бағалауға мүмкіндік береді.

Методы исследования (на русском) : Основной задачей является дизайн и сборка конструкций Cas13 и crРНК для экспрессии в растениях. Далее следует проведение агроинфильтрации растений для транзиентной экспрессии системы Cas13 и ко-инокулирование вирусными транскриптами (дикий тип вируса и ΔP19 мутант, Р19/75-78, мутанты GFP TBSV (RMJ-1, RMJ-2, RMJ-3)). Далее будут следовать визуальные наблюдения симптомов, визуальный мониторинг GFP, сбор образцов для молекулярного подтверждения, молекулярной детекции, иммуноблотинг, иммунопреципитация, жидко-жидкостное разделение фаз.

Методы исследования (на казахском) : Өсімдіктердегі экспрессиясы үшін, Cas13 және crРНҚ-GFP, crРНҚ-P19 дизайны мен құрылымын құрастыру негізгі мақсат болып табылады. Содан соң, Cas13 жүйесі мен вирус транскриптерінің (TBSV жабайы типі, ΔP19, Р19/75-78 және GFP TBSV (RMJ1, RMJ2, RMJ-3) мутанттары) транзиентті экспрессиясы үшін өсімдіктердің агроинфильтрациясы жүреді. Кейін белгілерді визуалды бақылау мен GFP мониторингі, молекулалық детекция мен молекулалық дәлелдеу үшін үлгілерді жинау, иммуноблоттинг, иммунопреципитация мен сұйық-сұйық фазалық бөліну жүргізіледі.

Obtained results and novelty (in Russian) : Была сравнена эффективность нацеливания CRISPR/Cas13 на вирусную РНК между различными последовательностями crРНК-GFP и crРНК-Р19. Была проведена агробактериальная инфильтрация листьев культурами Аgrobacterium, содержащие конструкции Cas13, crРНК-GFP и crРНК-Р19. Эффективность редактирования генов была оценена путем определения накопления вирусной РНК и экспрессии GFP и распространения в инфицированных тканях. Исследованы свойства связывания с киРНК Р19 во время применения системы редактирования генов CRISPR/Cas13. Конструкции, экспрессирующие Сas13 и crРНК-Р19 были агроинфильтрированы в растения. Вирус дикого типа и вирусный мутант Р19/75-78 были коинокулированы в листья растений. Был определен уровень накопления вируса в растениях.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : crРНҚ-GFP және crРНҚ-P19 әртүрлі реттіліктері арасындағы вирустық РНҚ-ға CRISPR/Cas13 бағытталуының тиімділігі салыстырылды. Cas13, crРНҚ-GFP және crРНҚ-P19 құрылымдары бар жапырақтардың Agrobacterium культураларымен агробактериальды инфильтрациясы жүргізілді. Генді өңдеу тиімділігі вирустық РНҚ жинақталуы мен GFP экспрессиясын анықтау арқылы бағаланды. P19 қиРНҚ-мен байланысу қасиеттері CRISPR/Cas13 гендік өңдеу жүйесін қолдану барысында зерттелді. Cas13 және crРНҚ-P19 экспрессиясы бар құрылымдар өсімдіктерге агроинфильтрацияланды. Жабайы типтегі вирус пен P19/75-78 вирустық мутант өсімдік жапырақтарына ко-инокуляцияланды. Өсімдіктерде вирустың жиналу деңгейі анықталды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : -

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : -

Level of implementation (in Russian) : -

Level of implementation (in Kazakh) : -

Efficiency (in Russian) : Полученные результаты данного фундаментального исследования будут служить основой для работ в прикладных исследованиях и разработках по созданию устойчивых к вирусу растений.

Efficiency (in Kazakh) : Бұл іргелі зерттеулердің нәтижелері вирусқа төзімді өсімдіктерді құру бойынша қолданбалы ғылыми-зерттеу және тәжірибелік-конструкторлық жұмыстарға негіз болады.

Field of application (in Russian) : молекулярная биология, вирусология, биохимия, биотехнология растений, генная инженерия.

Field of application (in Kazakh) : молекулалық биология, вирусология, биохимия, өсімдіктер биотехнологиясы, гендік инженерия