The object of research, development or design (in Russian) : NS ген вирус гриппа, фрагменты генов ТВ10.4, ESAT-6, Ag85A, Ag85B бактерии Mycobacterium bovis (М. bovis)

The object of research, development or design (in Kazakh) : Тұмау вирусының NS гені, TB10.4, ESAT-6, Ag85A, Ag85B бактерияларының Mycobacterium bovis (M. bovis) гендерінің фрагменттері

Aim of work (in Russian) : Разработка новой векторной противотуберкулезной вакцины крупного рогатого скота на основе рекомбинантных гриппозных вирусов, экспрессирующих микобактериальные протективные белки

Aim of work (in Kazakh) : Микобактериялық қорғаныш белоктарын көрсететін рекомбинантты тұмау вирустары негізінде ірі қара мал туберкулезіне қарсы жаңа векторлық вакцина жасау.

Методы исследования (на русском) : При выполнении исследований были использованы современные методы молекулярной биологии и генной инженерии: методы конструирования и синтеза олигодезоксинуклеотидов, амплификации сегментов генома, определения нуклеотидной последовательности ДНК и клонирование в плазмиды и компьютерного анализа нуклеиновых кислот

Методы исследования (на казахском) : Зерттеуді жүргізу кезінде молекулалық биология мен гендік инженерияның заманауи әдістері қолданылды: олигодезоксинуклеотидтерді жобалау және синтездеу, геном сегменттерін күшейту, ДНҚ-ның нуклеотидтік ретін анықтау және плазмидаларға клондау және нуклеин қышқылдарын компьютерлік талдау

Obtained results and novelty (in Russian) : - Были конструированы генетически стабильные рекомбинантные штаммы вируса гриппа, со встроенными генами M. bovis; - Были изучены научная, патентная литература и нормативная документация по вопросам анализа международных требований, нормативов, рекомендаций к противотуберкулезным вакцинам, формам выпуска и методам их введения; - Были синтезированы и клонированы химерные (NS1 с микобактериальными вставками) генетических сегментов в двунаправленные экспрессионные плазмиды рHW2000; - Были получены рекомбинантные гриппозные векторы, экспрессирующие микбактериальные белки М. bovis, с открытой рамки считывания NS1 белка вируса гриппа методом трансфекции плазмидами в систему куриных эмбрионов; - Проведен анализ рекомбинантных штаммов из каждого куриного эмбриона для проведения ОТ-ПЦР с целью подтверждения сохранности гетерологичной вставки в генном сегменте NS; - Были секвенированы сегменты РНК рекомбинантных штаммов и подтверждены экспрессии туберкулезных белков. Новизна - Впервые в Республике Казахстан, с использованием последних достижений молекулярной биологии и генной инженерии будет изготовлена и протестирована новая векторная вакцина против туберкулеза крупного рогатого скота.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : - M. bovis гендері енгізілген тұмау вирусының рекомбинантты штаммдары құрастырылды; - Туберкулезге қарсы вакциналарға қойылатын халықаралық талаптарды, нормативтерді, ұсынымдарды талдау, шығару нысандары мен оларды енгізу әдістері мәселелері бойынша ғылыми, патенттік әдебиет және нормативтік құжаттама зерделенді; - Химералық (NS1 микобактериялық кірістірулермен) генетикалық сегменттерді pHW2000 екі бағытты экспрессиялық плазмидтерде синтезделді және клондалды; - M. bovis микобактериялық ақуыздарын экспрессиялайтын, NS1 тұмау вирусы ақуызын ашық оқу щенбері бар рекомбинантты тұмау вирусы векторлары плазмидтері тауық эмбриондары жүйесіне енгізу арқылы алынды; - NS гендік сегментіндегі гетерологиялық кірістірудің қауіпсіздігін растау үшін әрбір тауық эмбрионынан рекомбинантты штаммдарға талдау жүргізілді; - Рекомбинантты штаммдардың РНҚ сегменттері секвенирленіп, туберкулез ақуыздарының көрінісі расталды. Жаңалығы - Қазақстан Республикасында алғаш рет молекулярлық биология мен гендік инженерияның соңғы жетістіктерін пайдалана отырып, ірі қара мал туберкулезіне қарсы жаңа векторлық вакцина жасалып, сынақтан өткізілетін болады.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Рекомбинантные вирусные штаммы были получены методом электропорации клеток Vero набором из 8-ми плазмид. Секвенирование, кДНК ситезированная от РНК рекомбинантных вирусов. ESAT-6 является ранним секреторным антигеном массой 6 кДа и размером 285 п.н. Для наработки ПЦР продукта гена ESAT-6 и его дальнейшего секвенирования использованы праймеры Esat-6_FP-TAGATGACAGAGCAGCAGTGGAATTTCGCGGGTA и Esat-6_RP-AAGGAATTCTGCGAACATCCCAGTGACGT. В результате проведенного секвенирования была получена нуклеотидная последовательность размером 349 п.н. Ag85A – секретирующийся антиген, размером 1014 п.н. Для наработки ПЦР продукта гена Ag85A и его дальнейшего секвенирования использованы праймеры Ag85A_FP-CCGATGCAGCTTGTTGACAGGGT и Ag85A_RP-TTGGAATTCGGCGCCCT-GGGGCGC. В результате секвенирования были получены нуклеотидные последовательности размером 1065 п.н. В результате секвенирования и сравнительного анализа нуклеотидная последовательность ESAT-6 и Ag85A исследованных проб имеет 96% сходство с другими штаммами микобактерии, представленными в базе данных GenBank.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Рекомбинантты вирустық штамдар 8 плазмид жиынтығы бар Vero жасушаларын электропорациялау арқылы алынды. Секвенирлеу, рекомбинантты вирустардың РНҚ-нан синтезделген кДНҚ. Массасы 6 кДа және өлшемі 285 ж.н. болатын ESAT-6 – ерте секреторлық антиген болып табылады. ESAT-6 генінің ПТР өнімін әзірлеу және оның әрі қарай секвенирлеу үшін Esat-6_FP-TAGATGACAGAGCAGCAGTGGAATTTCGCGGGTA және Esat-6_RP-AAGGAATTCTGCGAACATCCCAGTGACGT праймерлері пайдаланылды. Орындалған секвенирлеу нәтижесінде нуклеотидтер тізбегі 349 bp өнім алынды. Ag85A – өлшемі 1014 ж.н. болатын секреттеуші антиген. Ag85A генінің ПТР өнімін әзірлеу және оны одан әрі секвенирлеу үшін Ag85A_FP-CCGATGCAGCTTGTTGACAGGGT және Ag85A_RP-TTGGAATTCGGCGCCCT-GGGGCGC праймерлері пайдаланылды. Секвенирлеу нәтижесінде 1065 ж.н. нуклеотидтер тізбегі алынды. Секвенирлеу және салыстырмалы талдау нәтижесінде зерттелген үлгілердің ESAT-6 және Ag85A нуклеотидтер тізбегі GenBank дерекқорында ұсынылған басқа микобактерия штаммдарымен 96% ұқсастыққа ие екендігі анықталды.

Level of implementation (in Russian) : Степень внедрения – полученные результаты будут использованы при внедрении отечественной вакцины против туберкулеза КРС

Level of implementation (in Kazakh) : Енгізу дәрежесі - алынған нәтижелер өндірісте отандық ІҚМ туберкулезіне қарсы вакцина дайындалады

Efficiency (in Russian) :

Efficiency (in Kazakh) :

Field of application (in Russian) : Область применения – ветеринария

Field of application (in Kazakh) : Қолдану саласы- ветеринария