The object of research, development or design (in Russian) : гены вируса оспы овец sppv117 и sppv060, кодируемые ими белки, растения табака Nicotiana tabacum

The object of research, development or design (in Kazakh) : қой шешек вирусының sppv117 және sppv060 гендері, олармен кодталатын рекомбинантты ақуыздар, Nicotiana tabacum темекі өсімдіктер.

Aim of work (in Russian) : разработка технологии получения рекомбинантного антигена вируса оспы овец на базе растений табака N. tabacum с хлоропластной экспрессией гена sppv117, кодирующего антигенный белок SPPV-А27L

Aim of work (in Kazakh) : SPPV-A27L антигендік протеинін кодтайтын sppv117 генінің хлоропласт экспрессиясымен N. tabacum темекі өсімдігі негізінде рекомбинантты қой шешек вирусының антигенін алу технологиясын жасау

Методы исследования (на русском) : компьютерный анализ нуклеотидных и аминокислотных последовательностей, клонирование, рестрикционный анализ, электрофорез нуклеиновых кислот и белков, бомбардмент, методы растительных культур in vitro, ПЦР, спектрофотометрия, Вестерн-блоттинг, Саузерн-блоттинг, Нозерн блоттинг

Методы исследования (на казахском) : нуклеотид және аминқышқылы тізбектерінің компьютерлік талдауы, рестрикционды талдау, клондау, нуклеин қышқылдарының мен ақуыздардың электрофорезі, бомбалау, өсімдік дақылдарының in vitro әдістері, ПТР, спектрофотометрия, Вестерн-блоттинг, Саузерн-блоттинг

Obtained results and novelty (in Russian) : Для проведения генетической трансформации хлоропластов созданы четыре конструкции, обеспечивающие интеграцию полноразмерного гена sppv117 и делеционного варианта гена sppv060 (sppv060Δ), кодирующих соответственно белок SPPV-A27L и эктодомен белка SPPV-L1 в хлоропластный геном табака в межгенную область trnG/trnfM. Методом биобаллистики с помощью «генной пушки» получили линии табака, устойчивые к селективному антибиотику спектиномицину. ПЦР-анализом в присутствии генспецифичных праймеров подтвердили интеграцию целевой вставки в растительный геном. Последующие Нозерн-блот и Вестерн-блот анализы препаратов РНК и белковых экстрактов из полученных растений показали экспрессию целевого гена на транскрипционном и трансляционном уровне. Содержание рекомбинантных белков составляло от 0,30% до 0,99% от общего растворимого белка. Проведена проверка генетической однородности пластидных геномов девяти линий табака методом Саузерн-блоттинга, показавшая гомопластидность трех линий и гетеропластидность остальных шести. Методом металлоафинной хроматографии проведена очистка рекомбинантных белков из растительной ткани. Собраны семена транспластомных растений.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Хлоропластардың генетикалық трансформациясын жүзеге асыру үшін SPPV-A27L ақуызын және SPPV-L1 ақуызының эктодоменін, сәйкесінше, trnG/trnfM аймағында темекі хлоропласт геномына кодтайтын sppv117 генінің және sppv060 генінің жойылу нұсқасының интеграциялануын қамтамасыз ететін төрт құрылым жасалды. «Гендік мылтықтың» көмегімен биобаллистика әдісі бойынша селективті антибиотик спектиномицинге төзімді темекі линиялары алынды. Мақсатты кірістірудің өсімдік геномына интеграциясы генге тән праймердің қатысуымен ПТР талдауымен расталды. РНҚ препараттарын және алынған өсімдіктерден алынған ақуыз сығындыларын кейінгі Нозерн және Вестерн блот-анализдері мақсатты геннің транскрипциялық және трансляциялық деңгейде экспрессиясын көрсетті. Рекомбинанттың мөлшері жалпы еритін ақуыздың 0,30%-дан 0,99%-ға дейін болды. Тоғыз темекі линияларының пластидті геномдарының генетикалық біртектілігі Cаузерн әдісiмен сыналды, ол үш линияның гомопластикасын және қалған алтының гетеропластикасын көрсетті. Өсімдік тінінен рекомбинантты ақуыздарды тазарту үшін метал-аффинді хроматографиясы әдісі қолданылды. Транспластомды өсімдіктердің тұқымдары жиналды

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Хлоропласты показали себя в качестве подходящей экспрессионной системой для синтеза антигенных белков SPPV-А27L и SPPV-L1RΔ, выбранных нами в качестве субъединичных кандидатных вакцин против оспы овец; пластидный промотор Prrn по сравнению с промотором PpsbA обеспечивал более высокий выход вирусных белков;формат векторов pR117и pR060Δ приводит к реорганизации хлоропластной ДНК и изменению окраски листьев транспластомных растений.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Хлоропласттар қойдың шешек ауруына қарсы суббірлікке қарсы вакциналар ретінде таңдаған антигенді SPPV-A27L және SPPV-L1RΔ протеиндерін синтездеу үшін қолайлы экспрессия жүйесі екендігін көрсетті; Пластидті Prrn промоторы, PpsbA промоторымен салыстырғанда, вирустық ақуыздардың жоғары шығуын қамтамасыз етті; pR117 және pR060Δ векторларының форматы хлоропласттың ДНҚ-сының қайта құрылуына және транспластома өсімдіктерінің жапырақтарының түсінің өзгеруіне әкеледі.

Level of implementation (in Russian) :

Level of implementation (in Kazakh) :

Efficiency (in Russian) :

Efficiency (in Kazakh) :

Field of application (in Russian) : биотехнология растений, ветеринария

Field of application (in Kazakh) : өсімдік биотехнологиясы, ветеринария