The object of research, development or design (in Russian) : Объектом исследований является фермент репарации ДНК XthA H. pylori.

The object of research, development or design (in Kazakh) : Зерттеу нысаны H. pylori-ң XthA ДНҚ репарация ферменті.

Aim of work (in Russian) : Цель проекта - описание биохимической активности ранее не изученного фермента репарации ДНК бактериального патогена человека H. pylori.

Aim of work (in Kazakh) : Жоба мақсаты – адамның бактериялды патогені H. pylori бұрын соңды зерттелмеген ДНҚ репарация ферментінің биохимиялық белсендігін сипаттау.

Методы исследования (на русском) : Методы проведения работы - методы молекулярной биологии и биохимии.

Методы исследования (на казахском) : Жұмысты жүргізу әдісі – молекулалық биология және биохимия әдістері қолданды.

Obtained results and novelty (in Russian) : Были получены вектора pET-28c(+)/HpXthA и pBlueScriptII SK(+)/HpXthA, где ген был встроен под контроль промотора РНК полимеразы бактериофага Т7. На основе полученных векторов с помощью сайт-направленного мутагенеза были получены вектора pET-28c(+)/HpXthA D144N и pBlueScriptII SK(+)/HpXthA D144N, несущие ген мутантной АП-эндонуклеазы HpXthA D144N. Провели очистку рекомбинантной АП-эндонуклеазы XthA H. pylori (HpXthA) дикого типа и мутантной формы HpXthA D144N с помощью методов аффинной хроматографии. Очищенные ферменты обладают электрофоретической чистотой более 99%. Было выявлено, что АП-эндонуклеаза HpXthA обладает следующими эффективными активностями: АП-эндонуклеазной, 3'-фосфодиэстеразной и 3'-фосфатазной. Оптимальными условиями реакции для активности HpXthA: низкая ионная сила, высокая концентрация Mg2+, pH 8,0 и температура +30°C. Кинетические параметры показали, что HpXthA удаляет AП-сайт, 3'-сахарофосфат и 3'- фосфат в разрывах цепи ДНК с хорошей эффективностью (kcat/KM = 1240, 44 и 5,4 мин–1•мкМ–1, соответственно), аналогично E. coli XthA. HpXthA проявляет неспецифическую 3'→5' экзонуклеазную активность в отношении расщепления АП-сайтов и неповрежденного ДНК-дуплекса с рецессированным 3'-концом. Было показано, что мутантная АП-эндонуклеаза HpXthA D144N не обладает репарационной активностью. Гомологичное моделирование выявило, что фермент репарации HpXthA классифицируется как APE1-подобная эндонуклеаза.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : H. pylori геномды ДНҚ нан амплифицирленген xthA гені жұмыс істеу және сақтау үшін аралық pGEM-T векторына клондалды. H. pylori-дің xthA гені T7 бактериофагының РНҚ полимераза промоторының бақылауына енгізілген, pET-28c(+)/HpXthA және pBlueScriptII SK(+)/HpXthA векторлары алынды. Алынған рекомбинантты векторлардың ашық оқу шеңберінде мутацияларының жоқтығын растады. HpXthA D144N мутантты АП-эндонуклеаза гені бар, сайтқа бағытталған мутагенез арқылы алынған векторлар негізінде pET-28c(+)/HpXthA_D144N және pBlueScriptII SK(+)/HpXthA_D144N векторлары алынды. XthA H. pylori (HpXthA) жабайы типтегі рекомбинантты АП-эндонуклеазасын және HpXthA D144N мутантты формасын аффиндік хроматография әдістерін қолдана отырып тазартты. Тазартылған ферменттер 99% - дан астам электрофоретикалық тазалыққа ие. HpXthA АП-эндонуклеазасының келесі тиімді әрекеттері бар екендігі анықталды: АП-эндонуклеазды, 3'-фосфодиэстеразды және 3'-фосфатазды. Бұл жағдайда HpXthA-да инцизионды репарация функциясы жоқ. HpXthA белсенділігі үшін оңтайлы реакция шарттары: төмен иондық күш, Mg2+ жоғары концентрациясы, pН 8,0 және температура +30°C. Кинетикалық параметрлер HpXthA AП-сайты, 3'-қант фосфатын және 3'- фосфатты ДНҚ тізбегінің үзілістерінде жақсы тиімділікпен алып тастайтындығын көрсетті (kcat/KM = 1240, 44 және 5,4 мин–1•мкМ–1, сәйкесінше), E. coli XthA-ға ұқсас. HpXthA АП-сайттардың бөлінуіне және рецессивті 3'-соңы бар ДНҚ дуплекстеріне қатысты спецификалық емес 3'→5'экзонуклеаза белсенділігін көрсетеді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : -

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : -

Level of implementation (in Russian) : -

Level of implementation (in Kazakh) : -

Efficiency (in Russian) : -

Efficiency (in Kazakh) : -

Field of application (in Russian) : Область применения – молекулярная биология, энзимология.

Field of application (in Kazakh) : Қолдану аясы – молекулалық биология және энзимология.