The object of research, development or design (in Russian) : фибробласты, ооциты, клонированные эмбрионы, снежный барс (Panthera uncia)

The object of research, development or design (in Kazakh) : фибробласттар, ооциттер, клондалған эмбриондар, барыс (Panthera uncia)

Aim of work (in Russian) : Изучение фундаментальных аспектов межродового переноса ядер соматических клеток снежного барса (Panthera uncia) в энуклеированные яйцеклетки кошек (Felis catus) для криосохранения биоразнообразия животного мира.

Aim of work (in Kazakh) : Барыстың соматикалық жасуша ядроларының (Panthera uncia) жануарлар әлемінің биоәртүрлілігін криосақтау үшін энуклеацияланған мысық жұмыртқаларына (Felis catus) тұқым аралық тасымалдануының негізгі аспектілерін зерттеу.

Методы исследования (на русском) : - Микрохирургический метод энуклеации с использованием микроножа (Handemade Clon-ing). - Агглютинация фиброластов с цитопластами. Для этого проводится обработка фибробластов и цитопластов раствором фитогемагглютинина (PHA). Для выявления наиболее оптимальной концентрации PHA используются различные концентрации PHA в среде. - Слияние комплекса фибробласт+цитопласт с использование электрического разряда. После агглютинации комплекс (фибробласт + цитопласт) помещаем в камеру для электриче-ского слияния (Fusion chamber, BTX) и подключается электропоратор BTS 150/B для подачи электрических импульсов различной силы тока и длительности. - Активация сконструированных зародышей (цитопласт + фибробласт) с использованием Ca Inophore разных концентраций. - In vitro культивирование сконструированных зародышей (in vitro culture) используя метод Well of Well в CO2 инкубаторе или в Submarine Incubation System в тригазе.

Методы исследования (на казахском) : - Микрокопты қолдану арқылы энуклеацияның микрохирургиялық әдісі (Handemade Cloning). - Цитопластармен фиброласттардың агглютинациясы. Ол үшін фибробласттар мен цитопласттарды фитогемагглютинин (PHA) ерітіндісімен өңдеу жүргізіледі. Ең оңтайлы PHA концентрациясын анықтау үшін ортадағы әртүрлі PHA концентрациялары қолданылады. - Фибробласт+цитопласт кешенінің электр разрядын қолдану арқылы бірігуі. Агглютинациядан кейін кешен (фибробласт + цитопласт) электрлік біріктіру үшін камераға орналастырылады (Fusion chamber, BTX) және BTS 150/B электр портері әртүрлі ток күші мен ұзақтығының электрлік импульстарын беру үшін қосылады. - Әр түрлі концентрациядағы CA Inophore көмегімен құрастырылған эмбриондарды (цитопласт + фибробласт) белсендіру. - In vitro құрастырылған эмбриондарды өсіру (in vitro culture) CO2 инкубаторында немесе тригаздағы Submarine Incubation System жүйесінде Well of Well әдісін қолдану.

Obtained results and novelty (in Russian) : Проведенное исследование выявило, что эффективность энуклеации микрохирургическим методом с использованием микроножа (Hand Made Cloning) составила 88,8%, из 126 ооцитов успешно были энуклеированны 112 ооцитов. Было установлено, что успешное слияние было при использовании концентрации PHE в концентрации 500 мкг/мл и применении постоянного тока (DC) силой электрического поля 2,0 кВ/см, из 121 пары цитопласт + фибробласт составило 47,9%. При использовании других сочетаний постоянного тока (DC) силой электрического поля и разных концентраций PHE относительное количество слияния пар цитопласт + фибробласт было незначительным. Было установлено, что наиболее эффективным для активации клонированных эмбрионов является использование кальций ионофор (Ca Inophore) в концентрации 2 мкМ составило 29%. Использование других концентраций использование кальций ионофор (Ca Inophore) и экстракта сперматозоидов выявило низкую эффективность. 4. Было установлено, что использование метода культивирования клонированных эмбрионов Submarine incubation system (SIS) является более эффективным, чем использование СО2 инкубатора. Эмбрионы культивированные SIS достигли стадии развития бластоциста в количестве 15 штук, что составило 34,1%.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Жүргізілген зерттеу микрокопты (hand Made Cloning) қолданатын микрохирургиялық әдіспен энуклеацияның тиімділігі 88,8% - 8 құрағанын, 126 ооциттің 112-сі сәтті энуклеацияланғанын анықтады. 500 мкг/мл концентрацияда PHE концентрациясын қолдану және 2,0 кВ/см электр өрісінің күшімен тұрақты токты (DC) қолдану кезінде сәтті біріктіру анықталды, 121 жұп цитопласт + фибробласт 47,9% құрады. Электр өрісінің күшімен және әртүрлі PHE концентрацияларымен басқа тұрақты ток (DC) комбинацияларын пайдаланған кезде цитопласт + фибробласт жұптарының қосылуының салыстырмалы мөлшері шамалы болды. Клондалған эмбриондарды белсендіру үшін ең тиімді болып табылады кальций ионофоры (CA Inophore) 2 мкМ концентрациясында 29% құрады. Басқа концентрацияларды қолдану кальций ионофоры (CA Inophore) және сперматозоидтар сығындысы төмен тиімділікті анықтады. 4. Submarine incubation system (sis) клондалған эмбриондарды өсіру әдісін қолдану СО2 инкубаторын қолданудан тиімдірек екені анықталды. SIS өсірген эмбриондар бластоцистаның даму сатысына 15 данаға жетті, бұл 34,1% құрады.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Вид исследований фундаментальные. Проводимые исследования по изучению эффективности применения метода удаления пронуклеуса яйцеклеток и переноса ядра соматических клеток с использованием микрохирургического метода Hand Made Cloning. В связи с тем, что данный метод ранее не применялся как для энуклеации ооцитов домашних кошек, так и для переноса ядер соматических клеток снежного барса в энуклеированные ооциты домашних кошек эти исследования имеют высокую степень новизны. Также исследования дают возможность разработать методику и параметры физического воздействия (частота, интенсивность и длительность импульсов) для слияния фибробласта цитопласта.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Зерттеу түрі іргелі. Hand Made Cloning микрохирургиялық әдісін қолдана отырып, жұмыртқа пронуклеусын жою және соматикалық жасуша ядросының тасымалдану әдісін қолданудың тиімділігін зерттеу бойынша жүргізіліп жатқан зерттеулер. Бұл әдіс бұрын үй мысықтарының ооциттерін энуклеациялау үшін де, Барыстың соматикалық жасушаларының ядроларын үй мысықтарының энуклеацияланған ооциттеріне тасымалдау үшін де қолданылмағандықтан, бұл зерттеулер жаңалықтың жоғары дәрежесіне ие. Сондай-ақ, зерттеулер цитопласт фибробластын біріктіру үшін физикалық әсер ету әдістемесі мен параметрлерін (импульстардың жиілігі, қарқындылығы және ұзақтығы) жасауға мүмкіндік береді.

Level of implementation (in Russian) : На текущем этапе внедрение не предусмотрено

Level of implementation (in Kazakh) : Ағымдағы кезеңде енгізу қарастырылмаған

Efficiency (in Russian) : Высокая

Efficiency (in Kazakh) : Жоғары

Field of application (in Russian) : Область применения вышеуказанных ожидаемых результатов – Биотехнология, Assisted Reproduction Technology, репродуктивная биотехнология.

Field of application (in Kazakh) : Жоғарыда көрсетілген күтілетін нәтижелерді қолдану саласы-Биотехнология, Assisted Reproduction Technology, репродуктивті биотехнология.