The object of research, development or design (in Russian) : Бациллярные мио-инозитол-фосфогидролазы

The object of research, development or design (in Kazakh) : Бациллярлы мио-инозитол-фосфогидролазалар

Aim of work (in Russian) : Цель проекта заключается в получении и изучении мио-инозитол-фосфогидролазы бациллярного происхождения и получение рекомбинантной термостабильной фитазы на её основе.

Aim of work (in Kazakh) : Жұмыстың мақсаты-бациллярлы мио-инозитол-фосфогидролазаларды алу және зерттеу, сол негізде рекомбинантты фитаза алу.

Методы исследования (на русском) : Микробиология, молекулярная биология, биохимия

Методы исследования (на казахском) : Микробиология, молекулалық биология, биохимия

Obtained results and novelty (in Russian) : Штамм из лабораторной коллекций Bacillus paralicheniformis T7 — был проверен на фитазную активность. Культивирование проводили на среде с фитатом натрия при 30°C в течение 48 ч. Осветленную надосадочную жидкость использовали для очистки фермента. Концентрирование культуральной жидкости осуществляли осаждением сульфатом аммония, диализовали и очищали ионообменной хроматографией на DEAE-Sepharose. Активные фракции объединяли и анализировали электрофоретически. Оптимальная активность фитазы наблюдалась при 50°C и pH 7.0–8.0, при этом фермент сохранял свыше 80% активности после 30 мин инкубации. Ионы Mg²⁺ и Mn²⁺ повышали активность, Ca²⁺ оказывал стабилизирующий эффект, тогда как Zn²⁺ ингибировал. Гены мио-инозитол-фосфогидролаз PhyBPT7 и AppA амплифицировали из ДНК B. paralicheniformis T7 и E. coli, клонировали в вектор pET-28c(+), лигировали и трансформировали клетки E. coli BL21(DE3) и Arctic Express RP(DE3). Экспрессию индуцировали ИПТГ (0,5 мМ и 0,05 мМ соответственно). Электрофорез подтвердил синтез растворимых форм ферментов PhyBPT7 (41 кДа) и AppA (48,5 кДа). Полученные рекомбинантные штаммы криоконсервированы при –80°C в среде LB с глицерином (1:1).

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Bacillus paralicheniformis T7 зертханалық коллекциясынан алынған штамм - фитазалық белсенділікке тексерілді. Дақылдандыру натрий фитаты бар ортада 30°С-та 48 сағат бойы жүргізілді. Ферментті тазарту мақсатында центрифугаланған тұнбаүсті сұйықтығы қолданды. Дақылдық сұйықтықты концентрлеу аммоний сульфатымен тұндыру арқылы жүргізіліп, диализденгеннен кейін DEAE-Sepharose ионалмасу хроматографиясымен тазартылды.Белсенді фракцияларды біріктіріліп электрофоретикалық жолмен талданды. Фитазаның оңтайлы белсенділігі 50 ° C және рН 7,0-8,0 кезінде байқалды, фермент инкубацияның 30 минутынан кейін 80% -дан астам белсенділікті сақтады. Mg2+ және Mn2+ иондары белсенділікті арттырды, Са2+ тұрақтандырушы әсер көрсетті, ал Zn2+ тежеді.PhyBPT7 және AppA мио-инозитол-фосфогидролаза гендері B. paralicheniformis T7 және E. coli геномдық ДНҚ-нан амплификацияланып, pET-28c (+) векторына клондалып, лигирленгеннен кейін E. coli BL21 (DE3) және Arctic Express RP (DE3) жасушалары трансформацияланды. Экспрессияны ИПТГ арқылы (тиісінше 0,5 мМ және 0,05 мМ) индукциялады. Электрофорез PhyBPT7 (41 кДа) және AppA (48,5 кДа) ферменттерінің еріген түрлерінің синтезін растады. Алынған рекомбинантты штаммдар -80°С-та глицерин мен Лб (1:1) ортасында криоконсервацияланды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Получены 2 рекомбинантных штамма экспрессирующих мио-инозитол-фосфотгидролазы

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Мио-инозитол-фосфотгидролаза экспрессиялайтын 2 рекомбинантты штамм алынды.

Level of implementation (in Russian) : Не внедрено

Level of implementation (in Kazakh) : Енгізілген жоқ

Efficiency (in Russian) : Получены рекомбинантные штаммы-продуценты мио-инозитол-фосфогидролаз

Efficiency (in Kazakh) : Мио-инозитол-фосфогидролазалардың рекомбинантты штамм-продуценттері алынды

Field of application (in Russian) : Биотехнология

Field of application (in Kazakh) : Биотехнология