The object of research, development or design (in Russian) : Нанотела полученные против белков комплекса антигена 85 (Ag85A и Ag85B) Mycobacterium tuberculosis.

The object of research, development or design (in Kazakh) : Mycobacterium tuberculosis антигенінің 85 кешенінің (Ag85A және Ag85B) белоктарына қарсы өндірілген наноденелер.

Aim of work (in Russian) : Разработка и оценка терапевтического потенциала нанотел, нацеленных на ключевой белок патогенности и синтеза клеточной стенки Mycobacterium tuberculosis.

Aim of work (in Kazakh) : Mycobacterium tuberculosis клетка қабырғасының синтезі мен патогенділігіне жауап беретін негізгі белогына бағытталғаннаноденелердің емдік әлеуетін бағалау және әзірлеу.

Методы исследования (на русском) : Биоинформатический анализ генома, ПЦР амплификация, рестрикция, лигирование, бактериальная трансформация, агарозный гель электрофорез, эллюция ДНК, выделение плазмид, экспрессия белков, аффинная хроматография, ДНС-ПАГ электрофорез, вакцинация, иммуноферментный анализ, очистка антител, вестерн-блот-гибридизация.

Методы исследования (на казахском) : Геномды биоинформатикалық талдау, ПТР амплификация, рестрикция, бактериялық трансформация, агарозды гель электрофорезі, ДНҚ элюциясы, плазмидтерді бөліп алу, белок экспрессиясы, аффиндық хроматографиясы, ДСН-ПАГ электрофорезі, вакцинация, ферменттік иммуноанализ, антиденелерді тазарту, вестерн-блот-гибридизациясы.

Obtained results and novelty (in Russian) : Проведен компьютерный анализ генов Ag85A и Ag85B штамма M. tuberculosis H37Rv их оптимизация для оптимальной экспрессии в бактериальной системе E. coli. Выполнено клонирование генов M. tuberculosis Ag85A и Ag85B в бактериальный экспрессионный вектор pET28c. Была проведена экспрессия рекомбинантных белков Ag85A и Ag85B МТ слитых с С-концевыми 6xHis-тегами в экспрессионном штамме SHuffle С3030 клеток E. coli. Выбор штамма SHuffle С3030 основывался на том, что он в отличие от типичных штаммов E. coli, обеспечивает образование дисульфидных связей и правильной конформации белка. По результатам ДСН-ПААГ электрофореза и вестерн-блоттинга показано наличие теоритически предсказанных рекомбинантных белков размером около 37 кДа. Очистка рекомбинантных His-меченых белков Ag85A и Ag85B МТ была проведена методом аффинной хроматографии и с помощью ионообменной хроматографии. Выход рекомбинантного белка составил 7,5 мг/л культуры. Проведена иммунизация двух новозеландских белых кроликов с очищенными белками Ag85A и Ag85B МТ. Полученные сыворотки крови подвергали для определения титров антител. Титр антител был свыше 1:64000. Сыворотки в дальнейшем подвергали аффинной очистке для выделения и концентрирования специфических иммуноглобулинов с использованием цианогенбромид-активированной сефарозы (CNBr-Sepharose 4B), насыщения сульфатом аммония до 60-80%. Проведено определение специфичности очищенных поликлональных антител с помощью вестерн-блот-гибридизации и непрямого ИФА. Результаты

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Проведен компьютерный анализ генов Ag85A и Ag85B штамма M. tuberculosis H37Rv их оптимизация для оптимальной экспрессии в бактериальной системе E. coli. Выполнено клонирование генов M. tuberculosis Ag85A и Ag85B в бактериальный экспрессионный вектор pET28c. Была проведена экспрессия рекомбинантных белков Ag85A и Ag85B МТ слитых с С-концевыми 6xHis-тегами в экспрессионном штамме SHuffle С3030 клеток E. coli. Выбор штамма SHuffle С3030 основывался на том, что он в отличие от типичных штаммов E. coli, обеспечивает образование дисульфидных связей и правильной конформации белка. По результатам ДСН-ПААГ электрофореза и вестерн-блоттинга показано наличие теоритически предсказанных рекомбинантных белков размером около 37 кДа. Очистка рекомбинантных His-меченых белков Ag85A и Ag85B МТ была проведена методом аффинной хроматографии и с помощью ионообменной хроматографии. Выход рекомбинантного белка составил 7,5 мг/л культуры. Проведена иммунизация двух новозеландских белых кроликов с очищенными белками Ag85A и Ag85B МТ. Полученные сыворотки крови подвергали для определения титров антител. Титр антител был свыше 1:64000. Сыворотки в дальнейшем подвергали аффинной очистке для выделения и концентрирования специфических иммуноглобулинов с использованием цианогенбромид-активированной сефарозы (CNBr-Sepharose 4B), насыщения сульфатом аммония до 60-80%. Проведено определение специфичности очищенных поликлональных антител с помощью вестерн-блот-гибридизации и непрямого ИФА. Результаты

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Представленный проект направлен на разработку альтернативного противомикробного препарата на основе нанотел для лечения и профилактики заболевания, вызванного патогеном Mycobacterium tuberculosis.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Ұсынылған жоба Mycobacterium tuberculosis қоздырғышы тудыратын ауруларды емдеу және алдын алу үшін наноденелер негізіндегі балама микробқа қарсы препаратты әзірлеуге бағытталған.

Level of implementation (in Russian) : Отсутствует

Level of implementation (in Kazakh) : Жоқ

Efficiency (in Russian) : Отсутствует

Efficiency (in Kazakh) : Жоқ

Field of application (in Russian) : В иммунологии и фармакологии в качестве перспективного инструмента для диагностики, профилактики и терапии туберкулёза.

Field of application (in Kazakh) : Иммунология және фармакологияда туберкулезді диагностикалау, алдын алу және емдеудің перспективалы құралы ретінде.