The object of research, development or design (in Russian) : Иммунореактивные белки Babesia bigemina

The object of research, development or design (in Kazakh) : Babesia bigemina-ның иммунореактивті ақуыздары

Aim of work (in Russian) : Целью проекта является определение и синтез иммунодоминантных антигенов Babesia bigemina и разработка на их основе ИФА тест-системы для серологической диагностики бабезиоза КРС.

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның мақсаты Babesia bigemina иммунодоминантты антигендерін анықтау және синтездеу, сондай-ақ олардың негізінде ірі қара малдың бабезиозын серологиялық диагностикалауға арналған ИФТ тест-жүйесін әзірлеу.

Методы исследования (на русском) : При проведении исследований применялись иммунологические и молекулярно-генетические методы исследований.

Методы исследования (на казахском) : Зерттеулер барысында иммунологиялық және молекулалық-генетикалық зерттеу әдістері қолданылды.

Obtained results and novelty (in Russian) : Получены экспрессионные штаммы, продуцирующие рекомбинантные белки RAP-1 и AMA-1, которые планируется использовать для сравнительной оценки диагностической эффективности in silico идентифицированных антигенов. Определены параметры постановки ИФА с использованием рекомбинантных RAP-1 и AMA-1 антигенов B. bigemina. Отбор диагностически перспективных антигенов осуществлялся с помощью программы DeepTMHMM, основанной на модели глубокого обучения, которая прогнозирует локализацию аминокислотных остатков на основании первичной структуры белка. В результате анализа были выбраны два наиболее перспективных кандидатных антигена, ассоциированные с клеточной мембраной B. bigemina и сходные по структуре с микронемальными белками, участвующими в адгезии паразита к клеткам-хозяевам. Подтверждённые рекомбинантные плазмиды были трансформированы в штамм E.coli BL21(DE3). Проведена оптимизация условий экспрессии, рефолдинга и очистки белков. Определена специфичность кандидатных рекомбинантных белков в ИФА и Western blot. В качестве первичных антител использовали образцы плазмы крови крупного рогатого скота из пробы положительной по результатам ПЦР на B.bigemina. В качестве отрицательного контроля применяли образцы плазмы крупного рогатого скота, из пробы отрицательной по результатам ПЦР.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Экспрессиялық RAP-1 және AMA-1 рекомбинантты ақуыздарын өндіретін штамдар алынды. Бұл ақуыздар in silico әдісі арқылы анықталған антигендердің диагностикалық тиімділігін салыстырмалы бағалау үшін қолдану жоспарлануда. B. bigemina түріне тән рекомбинантты RAP-1 және AMA-1 антигендерін пайдалана отырып, ИФТ қою параметрлері анықталды. Диагностикалық тұрғыдан болашағы бар антигендерді іріктеу DeepTMHMM бағдарламасы арқылы жүзеге асырылды. Бұл бағдарлама терең оқыту моделіне негізделген және ақуыздың алғашқы құрылымы бойынша аминқышқыл қалдықтарының орналасуын болжайды.Талдау нәтижесінде B. bigemina жасушалық мембранасымен байланысқан және паразиттің иесі жасушаларына адгезия процесіне қатысатын микронемалық ақуыздарға ұқсас екі ең тиімді кандидат антиген таңдалды. Рекомбинантты плазмидтердің дұрыстығы расталып, олар E.coli BL21(DE3) штамына трансформацияланды. Ақуыздардың экспрессия, рефолдинг және тазарту жағдайлары оңтайландырылды. Кандидат рекомбинантты ақуыздардың ерекшелігі (спецификалығы) ИФТ және Western blot әдістерімен анықталды. Біріншілік антиденелер ретінде B. bigemina-ға ПТР нәтижесі бойынша оң сынамалардан алынған ірі қара мал қанының плазмалары қолданылды. Теріс бақылау ретінде ПТР нәтижесі теріс шыққан ірі қара мал плазма үлгілері пайдаланылды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Проведена идентификация иммуногенных протеинов B. bigemina и определены кодирующие их гены.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : B. bigemina иммуногендік ақуыздарының идентификациясы және оларды кодтайтын гендердің анықталуы.

Level of implementation (in Russian) : не внедрено

Level of implementation (in Kazakh) : енгізілмеген

Efficiency (in Russian) : Использование иммуногенных протеинов B. bigemina позволит повысить специфичность серологических исследований

Efficiency (in Kazakh) : B. bigemina иммуногендік ақуыздарын қолдану серологиялық зерттеулердің спецификалығын арттыруға мүмкіндік береді.

Field of application (in Russian) : Ветеринария

Field of application (in Kazakh) : Ветеринария