The object of research, development or design (in Russian) : ооцит, эмбрион, снежный барс

The object of research, development or design (in Kazakh) : ооцит, эмбрион, барыс

Aim of work (in Russian) : Изучение фундаментальных аспектов межвидового переноса ядер соматических клеток снежного барса (Panthera uncia) в энуклеированные яйцеклетки кошек (Felis catus) для криосохранения биоразнообразия животного мира.

Aim of work (in Kazakh) : Барыстың (Pantera uncia) соматикалық жасуша ядроларының жануарлар әлемінің биоәртүрлілігін криосақтау үшін энуклеацияланған мысық (Felis catus) жұмыртқаларына түраралық тасымалдануының негізгі аспектілерін зерттеу

Методы исследования (на русском) : - Получение постмортальных ооцит-кумулюс комплексов из овариальной ткани домашних кошек. Культивирование незрелых ооцит-кумулюсных комплексов домашних кошек до сохревания (метафаза II мейоза, in vitro maturation). Так как в дальнейших исследованиях используются только зрелые яйцеклетки, в связи с этим необходимо провести культивирование in vitro незрелых ооцит-кумулюс комплексов до их созревания. Для созревания большего количества яйцеклеток необходимо изучить влияние разлых составов культуральной среды TCM-Bicarbonate (концентрации гормонов FSH LH и сывороточного альбумина). - Метод денудации ооцит-кумулюс комплексов. Удаление кумулюсных клеток ооцит-кумулюс комплексов проводится с применением фермента гиалуронидазы. Необходимо использование наиболее щадящей концентрации фермента для того, чтобы не повреждить zona pellucida яйцеклеток. - Химическая инактивации хромосом яйцеклеток. Для этого используется введение демеколцина в состав среды, затем в среду помещают зрелые яйцеклетки. Необходимо изучить влияния разных концентрации демелкоцина в культуральной среде на эффективность энуклеации ооцитов овец. - Удаление zona pellucida яйцеклеток с использованием фермента проназы, для дальнейших манипуляций. -Микрохирургический метод удаления пронуклеуса из яйцеклеток домашних кошек с использованием инвертированного микроскопа и микроманипяторов Narishigi (Piezo Dril), микроинструменты: удерживающая микропипетка и микропипетка для биопсии пронуклеуса.

Методы исследования (на казахском) : -Үй мысықтарының аналық безінен постмортальды ооцит-кумулус кешендерін алу. Үй мысықтарының жетілмеген ооцит-кумулус кешендерін сақтау үшін өсіру (мейоз II метафаза, in vitro maturation). Кейінгі зерттеулерде тек жетілген жұмыртқалар қолданылатындықтан, осыған байланысты жетілмеген ооцит-кумулус кешендерін жетілгенге дейін in vitro өсіру қажет. Көбірек жұмыртқалардың жетілуі үшін TCM-Bicarbonate (FSH LH гормондары мен сарысулық альбумин концентрациясы) культуралық ортасының әртүрлі құрамдарының әсерін зерттеу қажет. -Ооцит-кумулус кешендерін денудациялау әдісі. Ооцит-кумулус кешендерінің кумулус жасушаларын жою гиалуронидаза ферментін қолдану арқылы жүзеге асырылады. Жұмыртқа жасушаларының zona pellucida зақымдалмауы үшін ферменттің ең жұмсақ концентрациясын қолдану қажет. - Жұмыртқа жасушаларының хромосомаларының химиялық инактивациясы. Ол үшін орта құрамына демеколцинді енгізу қолданылады, содан кейін жетілген жұмыртқалар сәрсенбіге орналастырылады. Қой ооциттерінің энуклеациясының тиімділігіне культуралық ортадағы әртүрлі демелкоцин концентрациясының әсерін зерттеу қажет. - Одан әрі манипуляциялау үшін проназа ферментін қолдана отырып, zona pellucida жұмыртқаларын жою. - Инверттелген микроскоп пен narishigi (Piezo Dril) микроманипаторларын қолдана отырып, үй мысықтарының жұмыртқасынан пронуклеусты жоюдың микрохирургиялық әдісі, микро құралдар: пронуклеус биопсиясына арналған микропипетка мен микропипетка.

Obtained results and novelty (in Russian) : 1. Проведенное исследование выявило, что наиболее эффективными компонентами являются гормоны ФСГ и ЛГ (FSH LH), а также телячий сывороточный альбумин (CSA) при их использовании в культуральной среде для in vitro созревания (IVM) ооцитов домашних кошек до стадии метафаза II мейоза. 2. Было установлено, что наиболее эффективным для удаления zona pellucida ооцитов домашних кошек является раствор гиалуронидазы 2 mg/ml. Установлено, что наиболее эффективной концентрацией для денудации ооцитов домашних кошек является гиалуронидаза 1 mg/ml. 3. После культивирования 129 ооцит-кумулюс комплекса было выявлено, что наиболее эффективной концентрацией является добавление демеколцина 0,04 μg/mL, при этом наблюдалось организация веретена метафазы и экструзия первого полярного тельца у 42% ооцитов. Результаты показывают, что демеколцин может использоваться в качестве потенциального реагента для индуцированной энуклеации мейотически созревающих ооцитов домашних кошек и может значительно облегчить исследования в области переноса ядер. 4. В исследовании из 47 ооцитов, количество выживших составило 19 штук, что составляет 40,4% и количество 4-х клеточных эмбрионов составило 7 эмбрионов, что составляет 14,8%. Метод удаления пронуклеуса с Piezo Drill возможен для применения. Следует отметить, что данный метод для исследуемых видов ранее не применялся и публикации отсутствуют.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : 1. Жүргізілген зерттеу ең тиімді компоненттер FSH және LH (FSH LH) гормондары, сондай-ақ бұзау сарысуы альбумині (CSA) болып табылатындығын анықтады.in vitro жетілу (IVM) кезеңіне дейін үй мысықтарының ооциттері метафаза II мейоз. 2. Үй мысықтарының ооциттерін zona pellucida жою үшін ең тиімді гиалуронидаза 2 mg/ml ерітіндісі екені анықталды. Үй мысықтарының ооциттерін денудациялау үшін ең тиімді концентрация 1 mg/ml гиалуронидаза екені анықталды. 3. 129 ооцит-кумулус кешенін өсіргеннен кейін ең тиімді концентрация 0,04 μg/mL демеколцинді қосу болып табылатыны анықталды, ооциттердің 42% -. метафаза шпиндельінің ұйымдастырылуы және бірінші полярлы дененің экструзиясы байқалды. Нәтижелер демеколцинді мейоздық жетілген үй мысықтарының ооциттерін индукцияланған энуклеациялау үшін әлеуетті реагент ретінде пайдалануға болатынын және ядролық тасымалдау зерттеулерін айтарлықтай жеңілдететінін көрсетеді. 4. 47 ооциттен тұратын зерттеуде тірі қалғандардың саны 19 дана болды, бұл 40,4% және 4 жасушалық эмбриондардың саны 7 эмбрионды құрады, бұл 14,8% құрайды. Piezo Drill көмегімен пронуклеусты жою әдісі қолдануға болады. Айта кету керек, зерттелетін түрлер үшін бұл әдіс бұрын қолданылмаған және жарияланымдар жоқ.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Вид исследований фундаментальные. Проводимые исследования по изучению эффективности применения метода удаления пронуклеуса яйцеклеток и переноса ядра соматических клеток с использованием микроманипуляторов Narishige (Piezo Drill). В связи с тем, что данный метод ранее не применялся как для энуклеации ооцитов домашних кошек, так и для переноса ядер соматических клеток снежного барса в энуклеированные ооциты домашних кошек эти исследования имеют высокую степень новизны. Также исследования дают возможность разработать методику и параметры физического воздействия (частота, интенсивность и длительность импульсов) для хэтчинга zona pellucida ооцитов и пенетрацию цитоплазмы ооцитов домашних кошек для эффективной энуклеации, а также трансфера соматической клетки.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Iргелі зерттеулер. (Piezo Drill) микроманипуляторларын пайдалана отырып, жұмыртқа пронуклеусын жою және соматикалық жасуша ядросын тасымалдау әдісін қолданудың тиімділігі зерттеледі. Бұл әдіс бұрын үй мысықтарының ооциттерін энуклеациялау үшін де, Барыстың соматикалық жасушаларының ядроларын үй мысықтарының энуклеацияланған ооциттеріне тасымалдау үшін де қолданылмағандықтан, бұл зерттеулер жаңалықтың жоғары дәрежесіне ие. Сондай-ақ, зерттеулер ооциттердің zona pellucida хэтчингі үшін физикалық әсер ету әдістемесі мен параметрлерін (импульстардың жиілігі, қарқындылығы және ұзақтығы) және тиімді энуклеация, сондай-ақ соматикалық жасушаның трансфері үшін үй мысықтарының ооцит цитоплазмасының енуін әзірлеуге мүмкіндік береді.

Level of implementation (in Russian) : На текущем этапе внедрение не предусмотрено

Level of implementation (in Kazakh) : Ағымдағы кезеңде енгізу қарастырылмаған

Efficiency (in Russian) : Высокая

Efficiency (in Kazakh) : Жоғары

Field of application (in Russian) : Область применения вышеуказанных ожидаемых результатов – Биотехнология, Assisted Reproduction Technology, репродуктивная биотехнология.

Field of application (in Kazakh) : Жоғарыда көрсетілген күтілетін нәтижелерді қолдану саласы-Биотехнология, Assisted Reproduction Technology, репродуктивті биотехнология.