The object of research, development or design (in Russian) : Наноантитела к вирусу бешенства

The object of research, development or design (in Kazakh) : Құтыру вирусына қарсы наноантиденелер

Aim of work (in Russian) : Разработка новых нанотел для эффективной нейтрализации вируса бешенства. Конструирование высокоспецифичного и чувствительного зонда на основе нанотел для быстрого обнаружения вируса бешенства в иммуноанализах.

Aim of work (in Kazakh) : Құтыру вирусын эффективті бейтараптандыратын жаңа наноантиденелерді жасау. Иммундық талдауларда Құтыру вирусын жылдам анықтауға арналған наноантиденелерге негізделген жоғары спецификалық және сезімтал зондтты құрастыру.

Методы исследования (на русском) : Выделение и клонирование кДНК генов, ОТ-ПЦР, ПЦР в реальном времени, агарозный гель электрофорез, ДНС-ПААГ электрофорез, аффинная хроматография, получение и очистка антител, ИФА, Вестерн блоттинг, ДНК секвенирование, биопэннинг, иммунизация верблюдов.

Методы исследования (на казахском) : кДНҚ гендерін бөліп алу және клондау, КТ-ПТР, сандық ПТР, агорозалық гель-электрофорез, ДСН-ПААГ электрофорезі, аффинділік хроматографиясы, антиденелерді өндіру және тазарту, байланысты иммуносорбенттік талдау, вестерн-блоттинг, ДНҚ секвенирлеу, биопэннинг, түйелерді иммундау.

Obtained results and novelty (in Russian) : Проведена подкожная иммунизация двух новозеландских белых кроликов с очищенным рекомбинантным ExRABVG-GS белком. Был определен титр поликлональных антител непрямым ELISA-методом. Антитела были очищены и с концентрированы методом осаждения. Далее они были проанализированы на иммуногенность методами дот-блот и вестерн-блот. Было показано, что антитела распознают как неденатурированные, так и денатурированные белки. Была проведена иммунизация двугорбых верблюдов инактивированным вирусом бешенства штамм CVS-11 и рекомбинантным белком ExRABVG-GS по отдельности. Из 150 мл периферической крови с использованием Ficoll-Paque PLUS были изолированы мононуклеарные клетки. Из них в последующем была выделена сумарная РНК, из которой были получены библиотеки кДНК генов наноантител. Создание библиотек кДНК, кодирующих VHH (нанотела), проводилось путем клонирования ПЦР продуктов в фагмидный вектор pADL-23c. Трансформанты TG1 E.coli, содержащие pADL-23c/VHH вектора, использовались для производства фагов M13K07, кодирующие новые VHH. Методом био-пэннинга были отобраны наноантитела специфичных к RABV-G с помощью непрямого ELISA метода где в качестве покрывающего антигена были использованы ранее очищенный рекомбинантный белок ExRABVG-GS и набор Platelia® Rabies II (BioRad). Далее было проведено секвенирование отобранных наноантител, их экспрессия в E. coli штамме WK6 и очистка His-меченых белков с помощью аффинной хроматографии с использованием системы Akta start FPLC.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Тазаланған ExRABVG-GS рекомбинантты белогымен екі жаңазенландиялық ақ қояндарға теріасты иммунизациясы жүргізілді. Жанама ELISA әдісімен поликлональді антиденелердің титрі анықталды. Антиденелер тұндыру әдісімен концентрлендіріліп, тазаланды. Кейін олардың иммуногенділігі дот-блот пен вестерн-блот әдістері арқылы анықталынды. Антиденелер денатурацияланбаған белоктармен қатар денатурацияланған белоктарды да танитыны көрсетілді. 150 мл шеткі қаннан Ficoll-Paque PLUS-ті қолдана отырып мононуклеарлы жасушалар бөлініп алынды. Кейіннен олардан жалпы РНҚ бөлініп алынып, ол РНҚ-дан наноантиденелердің кДНҚ-сының кітапханасы алынды. VHH-ті (наноденені) кодтайтын кДНК кітапханасын құрастыру ПЦР өнімдерін pADL-23c фагмидалық векторына клондау арқылы жүзеге асырылды. pADL-23c/VHH векторы бар TG1 E.coli трансформанттары жаңа VHH-ті кодтайтын M13K07 фагтарының өндірісіне қолданылды. Био-пэннинг әдісімен RABV-G-ге спецификалық наноантиденелер жанама ELISA әдісін қолдану арқылы анықталынды. Жанама ELISA әдісінде жабушы антиген ретінде бұрын тазаланған рекомбинантты ExRABVG-GS белогы мен Platelia® Rabies II (BioRad) жиынтығы қолданылды. Кейіннен іріктеліп алынған наноантиденелер секвенирленіп, E. Coli-дің WK6 штаммында экспрессияланып Akta start FPLC жүйесінде his-таңбаланған белоктар аффинді хроматография әдісімен тазаланып алынды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : В нашей работе были получены новые наноантитела против вируса бешенства штамм CVS-11 из иммунизированных двугорбых верблюдов (Camelus bactrianus). Новые комбинации CDR последовательностей делают эти антитела перспективными в борьбе с вирусом бешенства.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Біздің жұмысымызда иммунизацияланған бактриан түйелерінен (Camelus bactrianus) құтыру вирусының CVS-11 штаммына қарсы жаңа наноантиденелер алынды. CDR тізбектерінің жаңа комбинациялары бұл антиденелерді құтыру вирусымен күресте перспективалы етеді.

Level of implementation (in Russian) : отсутствует

Level of implementation (in Kazakh) : жоқ

Efficiency (in Russian) : Запланированные работы выполнены полностью. Опубликована 1 статья в журналах входящих в перечень КОКСНВО МНВО РК.

Efficiency (in Kazakh) : Жоспарланған жұмыстар толығымен орындалды. Қазақстан Республикасы Ғылым және жоғары білім министрлігінің Ғылым және жоғары білім саласындағы сапаны қамтамасыз ету комитетінің тізіміне енгізілген журналда 1 мақала жарық көрген.

Field of application (in Russian) : Иммунология, фармокология

Field of application (in Kazakh) : Иммунология, фармокология