The object of research, development or design (in Russian) : Рекомбинантные внешне-мембранные и периплазматические белки бруцелл

The object of research, development or design (in Kazakh) : Бруцеллалардың рекомбинантты сыртқы мембраналық және периплазмалық ақуыздары

Aim of work (in Russian) : Получение рекомбинантных белков бруцелл и приготовление эритроцитарного белкового антигена.

Aim of work (in Kazakh) : Рекомбинантты бруцелла ақуыздарын алу және эритроциттік ақуыз антигенін дайындау.

Методы исследования (на русском) : молекулярные, серологические, иммунохимические и биотехнологические

Методы исследования (на казахском) : молекулалық, серологиялық, иммунохимиялық және биотехнологиялық

Obtained results and novelty (in Russian) : Проведена наработка штаммов продуцентов рекомбинантных белков бруцелл: Escherichia coli BL21(DE3)/pET32- Omp19, BL21(DE3)/pET32- Omp25, BL21(DE3)plysS /pET32- Omp31,BL21(DE3)/pET22- SOD и BL21(DE3)/pET22- BP26. После клетки разрушали ультразвуком в течение 2-3 минуты в пульс-режиме. Очистку белков проводили хроматографическим методом. Периплазматические белки (SOD и BP26) и белки наружной мембраны (Omp19, Omp25 и Omp31) бруцелл были очищены в количестве не менее 3 мг. Получены Анти-Brucella abortus 19 и анти - B. melitensis Rev1 сыворотки кроликов породы советская шиншилла следующим образом, подопытным животным 4-х кратно с интервалом в 14 дней вводили цельные инактивированные клетки бактерий в количестве 100тыс.кл. Отбор крови для тестирования в н-ИФА проводили на 17 и на 45-й день после начала иммунизации. Результаты показали, что использованные белки распознавались кроличьими антисыворотками до титров 1:800-1:12 800, что свидетельствует об антигенности (аутентичности) приготовленных препаратов. Приготовлены взвеси эритроцитов барана и проведена сенсибилизация формалинизированных эритроцитов рекомбинантными белками. Полученную взвесь сенсибилизированных эритроцитов использовали в качестве антигена. Результаты показали, что рекомбинантные белки характеризуются различной антигенностью и специфичностью по отношению к анти-Brucella антителам и могут быть использованы в дальнейшей работе в качестве сенситинов в РНГА для определения противобруцеллезных антител.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Рекомбинантты бруцелла ақуыздарын өндіретін штамдары өсіріліп жиналды: Escherichia coli BL21(DE3)/pET32 - OMP19, BL21(DE3)/pET32 - Omp25, BL21(DE3)plysS /pET32 - Omp31,BL21(DE3)/pET22 - SOD және BL21(DE3)/pET22 - bp26. Жасушады импульстік режимде 2-3 минут ішінде ультрадыбыспен бұзылды. Ақуыздарды тазарту хроматографиялық әдіспен жүргізілді. Бруцеллалардың периплазмалық ақуыздары (SOD және BP26) және сыртқы мембраналық ақуыздары (Omp19, Omp25 және Omp31) 3 мг тазартылып алынды. Анти-Brucella abortus 19 және анти - B. melitensis Rev1 сарысулары шиншилла тұқымының қояндарынан келесідей алынды, жануарларға 14 күн аралығында 4 рет 100 мың жасуша мөлшерінде тұтас инактивацияланған бактерия жасушалары енгізілді.Тестілеу үшін қан алуды иммундеу басталғаннан кейін 17-ші және 45-ші күні жүргізілді. Талдау нәтижелері көрсеткендей, пайдаланылған ақуыздар 1:800-1:12,800 титріне дейін бруцеллаға спецификалық қоян сарысуларымен әрекеттесті, бұл дайындалған препараттардың антигенділігін (түпнұсқалығын) көрсетеді. Қой эритроциттерінің суспензиялары дайындалып, рекомбинантты ақуыздармен формалинизацияланған эритроциттердің сенсибилизациясы жүргізілді. Алынған сенсибилизацияланған эритроциттердің суспензиясы антиген ретінде пайдаланылды. Рекомбинантты ақуыздардың қоян анти-Бруцелла қансарысуына қатысты әртүрлі антигендік және телімділік қасиеттерімен сипатталатынын және одан әрі жұмыста бруцеллезге қарсы антиденелерді анықтау үшін ЖГАР сенситиндері ретінде пайдалануға болатынын көрсетті.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Отработаны основные показатели сенсибилизации эритроцитов с рекомбинантными внешне-мемранными и периплазматическими белками

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Эритроциттердің рекомбинантты сыртқы мембраналық және периплазмалық ақуыздармен байланысуының негізгі көрсеткіштері оңтайландырылды

Level of implementation (in Russian) : не внедрено

Level of implementation (in Kazakh) : енгізілген жоқ

Efficiency (in Russian) : использование рекомбинантных белков для создания эритрацитарного диагностикума

Efficiency (in Kazakh) : эритроциттер диагнозын жасау үшін рекомбинантты ақуыздарды қолдану

Field of application (in Russian) : ветеринария

Field of application (in Kazakh) : ветеринария