The object of research, development or design (in Russian) : Протеолитические ферменты

The object of research, development or design (in Kazakh) : Протеолитикалық ферменттер

Aim of work (in Russian) : Изучение новых протеолитических ферментов бактериального происхождения

Aim of work (in Kazakh) : Бактериялардан алынатын жаңа протеолитикалық ферменттерді зерттеу болып табылады

Методы исследования (на русском) : Микробиология, молекулярная биология, биохимия, биотехнология

Методы исследования (на казахском) : Микробиология, молекулярная биология, биохимия, биотехнология

Obtained results and novelty (in Russian) : Проведено полногеномное секвенирование протеолитического штамма Bacillus paralicheniformis T7 с использованием технологии Oxford Nanopore на нанопоровом секвенаторе MinION. Была получена и аннотирована полная нуклеотидная последовательность штамма (4359207 п.о.), которая депонирована в международной базе данных NCBI GenBank за номером CP124861. Клонированы гены субтилизина и S8. Проведена экспрессия генов протеаз в E. coli и получено внутриклеточное накопление рекомбинантных протеаз. Очищенные рекомбинантные протеазы изучены в зимографическом анализе, в биохимических экспериментах с использованием различных субстратов. Установлена субстратная специфичность рекомбинантных протеаз в отношении фибрилярных и глобулиновых белков. Проведен сбор почвы из разных 7 регионов Казахстана и образцов биоматериала (белковые отходы). Бактериальные изоляты идентифицировали на основании морфологических, молекулярно-генетических и биохимических свойств как Bacillus paralicheniformis, Solibacillus sp., Bacillus atrophaeus, Peribacillus frigoritolerans, Bacillus subtilis, Bacillus mojavensis, Bacillus licheniformis. Методами хроматографии выделены и очищены новые бактериальные протеазы. Определены биохимические характеристики бактериальных протеаз зимографическим анализом на казеине, кератине, альбумине, коллагене. Определены температурные и кислотно-основные характеристики протеаз. Установлено, что протеазы относятся к классу сериновых протеаз с активностью в диапазоне 35-50°С, рН 6-8.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Bacillus sp T7 протеолитикалық штаммының толық геномдық секвенирленуі Oxford Nanopore технологиясын қолдана отырып, MinION нанопора секвенаторында жүргізілді. Штамның толық нуклеотидтік тізбегі (4359207 ж.т.) алынып аннотацияланды, ол CP124861 нөмірімен халықаралық NCBI GenBank дерекқорында сақталады. Субтилизин және S8 гендері клондалды. Протеаза гендерінің экспрессиясы E. coli-де жүргізіліп, рекомбинантты протеазалардың жасушаішілік жинақталуына қол жеткізілді. Тазартылған рекомбинантты протеазалар зимографиялық талдаудан және әртүрлі субстраттар арқылы биохимиялық зерттеулерден өткізілді. Фибриллярлық және глобулярлық ақуыздар үшін рекомбинантты протеазалардың субстраттық арнайылығы анықталды. Қазақстанның әр түрлі 7 облысынан топырақ және биоматериал үлгілері (ақуыз қалдықтары) алынды. Бактериялық изоляттар морфологиялық, молекулалық-генетикалық және биохимиялық қасиеттеріне қарай Bacillus paralicheniformis, Solibacillus sp., Bacillus atrophaeus, Peribacillus frigoritolerans, Bacillus subtilis, Bacillus mojavensis, Bacillus licheniformis болып анықталды. Жаңа бактериялық протеазалар хроматографиялық әдістер арқылы бөлініп, тазартылды. Бактериялық протеазалардың биохимиялық сипаттамалары казеин, кератин, альбумин, коллаген бойынша зимографиялық талдау арқылы анықталды. Протеазалардың температуралық және қышқылдық-негіздік сипаттамалары анықталды. Белсенділігі 35-50°С, рН 6-8 диапазонында протеазалар сериндік протеазалар класына жататыны белгілі болды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Выделено и идентифицировано 7 штаммов. Клонированы гены 2 протеаз.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : 7 штамм бөлініп алынды және анықталды. 2 протеазаның гендері клондалды.

Level of implementation (in Russian) : Нет

Level of implementation (in Kazakh) : Жоқ

Efficiency (in Russian) : Высокая

Efficiency (in Kazakh) : Жоғары

Field of application (in Russian) : Биотехнология

Field of application (in Kazakh) : Биотехнология