The object of research, development or design (in Russian) : Рекомбинантный антиген Trichinella spp.

The object of research, development or design (in Kazakh) : Trichinella spp. рекомбинантты антигені

Aim of work (in Russian) : получение рекомбинантного белка экскреторно-секреторного продукта Trichinella spp

Aim of work (in Kazakh) : Trichinella spp. экскреторлық секреторлық өнімінің рекомбинантты ақуызын алу

Методы исследования (на русском) : молекулярные, иммунологические, биотехнологические

Методы исследования (на казахском) : молекулалық, иммунологиялық, биотехнологиялық

Obtained results and novelty (in Russian) : Проведена работа по выделению личинок трихинелл из зараженных кроликов. РНК выделяли методом TRIzol, концентрация РНК составила 160нг/мкл. Получены последовательности кодирующего участка гена ЭС-продукта Trichinella spp. Проведен биоинформатический анализ и создан дизайн генно-инженерной конструкции с геном Tsp1. Гены, кодирующие белки Trichinella spp., амплифицировали с помощью ПЦР из кДНК с использованием специфических праймеров, добавленные для облегчения клонирования в вектор экспрессии pET28. Рекомбинантные белки, экспрессировались в виде телец включения. Очистку проводили с помощью набора колонок HisTrap для аффинной очистки. Иммуногенность полученного рекомбинантного белка проверяли путем введения препарата подопытным животным. Тестирование сывороток крови проводили в н-ИФА с рекомбинантным, ЭС-Аг и С-Аг. В результате выявили наличие антител в сыворотке крови иммунизированных животных в титрах 1:12800 на рекомбинантный антиген, 1:6400 на ЭС-Аг и С-Аг. Антигенность и диагностическую ценность рекомбинантного белка проверяли на сыворотках крови эксперементально зараженных личинками трихинелл кроликах. Наличие антител к рекомбинантному белку выявлено уже на 14-й день после заражения, что говорит о возможности использования антигена в ранней диагностике трихинеллеза животных. Принято участие в работе международной научно-практической конференции и опубликована 1 (одна) статья в отечественном издании, рекомендованном КОКСНВО.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Секвенирлеу үшін жұқтырған қояндардан трихинелла балаңқұрттары алынды. Балаңқұрттардан TRIzol әдісімен РНҚ бөлінді, бөлінген РНҚ концентрациясы 160 нг/мкл құрады. Trichinella spp. экскреторлық-секреторлық өнімін кодтайтын ген бөлігінің тізбегі алынды. Биоинформатикалық талдау жүргізілді және Tsp1 генінің гендік-инженерлік дизайны жасалды. Trichinella spp. ақуыздарын кодтайтын гендер pET28 экспрессия векторына клондауды жеңілдету үшін праймерлерді пайдаланып кДНК-дан ПТР арқылы амплификацияланды. Рекомбинантты ақуыздар инклюзивті денелер түрінде экспрессияланды. Гистидинмен белгіленген HisTrap коллонкалар жиынтығымен тазартылды. Алынған рекомбинантты ақуыздың иммуногенділігі жануарларға егу арқылы тексерілді. Қан сарысуларын тестілеуді ИФТ жанама әдісінде рекомбинантты, Эс-Аг және С-Аг қолдану арқылы жүргізілді. Нәтижесінде иммунделген жануарлардың қан сарысуында рекомбинантты антигенге 1:12800, ЭС-Аг-ға 1:6400 және С-Аг-ға 1:6400 титрлерінде антиденелер анықталды. Рекомбинантты ақуыздың антигендігі мен диагностикалық құндылығы трихинелла балаңқұрттарымен эксперименталды түрде жұқтырылған қояндардың сарысуларымен тексерілді. Рекомбинантты ақуызға антиденелердің болуы жұқтырғаннан кейінгі 14-ші күні анықталды, бұл жануарлардың трихинеллезін балауда антигенді қолдану мүмкіндігін көрсетеді. Халықаралық ғылыми-практикалық конференция жұмысына қатысып, ҒЖБССҚК ұсынған отандық басылымда 1 (бір) мақала жарияланды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : создана генетическая конструкция для получения рекомбинантного белка

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : рекомбинантты ақуызды алуға арналған генетикалық құрылым жасалды

Level of implementation (in Russian) : не внедрено

Level of implementation (in Kazakh) : енгізілген жоқ

Efficiency (in Russian) : рекомбинантный белок обладает высокой диагностической ценностью

Efficiency (in Kazakh) : рекомбинантты ақуыздың диагностикалық құндылығы жоғары

Field of application (in Russian) : ветеринарная диагностика

Field of application (in Kazakh) : ветеринарлық диагностика