The object of research, development or design (in Russian) : Объектом исследований являются ферменты Cas12a из Moraxella bovis и Moraxella equi

The object of research, development or design (in Kazakh) : Зерттеу объектісі - Moraxella bovis және Moraxella equi-ден алынған Cas12a ферменттері

Aim of work (in Russian) : Цель проекта - характеристика новых программно-управляемых РНК-направляемых эндонуклеаз системы CRISPR/Cas, конкретно ферментов Cas12a из Moraxella bovis и Moraxella equi, с целью их последующего применения в области диагностики

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның мақсаты CRISPR/Cas жүйесінің бағдарламамен басқарылатын РНҚ басқарылатын жаңа эндонуклеазаларын, атап айтқанда Moraxella bovis және Moraxella equi-ден алынған Cas12a ферменттерін, оларды кейіннен диагностика саласында пайдалану мақсатында сипаттау болып табылады.

Методы исследования (на русском) : Методы проведения работы - методы молекулярной биотехнологии, генетической инженерии и биохимии

Методы исследования (на казахском) : Жұмыс әдістері – молекулалық биотехнология, гендік инженерия және биохимия әдістері

Obtained results and novelty (in Russian) : Получены генов ферментов Cas12a из Moraxella bovis и Moraxella equi. Проведено клонирование этих генов в промежуточные вектора для проведения сиквенсного анализа, а также для обеспечения наработки и хранения этих генов. Получены генетические конструкции на основе экспресирующих векторов для оптимизации экспрессии и хроматографической очистки эндонуклеаз. Проведена трансформация клеток E. coli с целью оптимизации условий экспрессии и очистки, что позволило наработать различные формы рекомбинантных белков Cas12a. Был проведен дизайн и синтез гидовых РНК (crRNA). Эти комплексы затем были использованы для проверки их специфической активности расщепления ДНК в in vitro условиях. Проведено определение последовательности PAM-участка, а также для оценки активности эндонуклеазы Cas12a в отношении различных субстратов. Это включало в себя подбор оптимальных условий для биохимической реакции, включая температуру и время реакции, концентрацию компонентов реакции и состав реакционного буфера. Было проведено гомологичное моделирование и получение мутантных форм ферментов Cas12a. Это позволило идентифицировать аминокислоты, находящиеся в активных центрах белков и критичные для их активности. Была проведена сравнительная оценка ферментативной активности расщепления ДНК полученными ферментами с известными гомологами, что дало ценные данные для дальнейших исследований и разработок в этой области

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Cas12a ферменттеріне арналған гендер Moraxella bovis және Moraxella equi-ден алынды. Бұл гендер дәйектілік талдауын жүргізу үшін, сондай-ақ осы гендердің өндірілуі мен сақталуын қамтамасыз ету үшін аралық векторларға клондалды. Эндонуклеазалардың экспрессиясын және хроматографиялық тазартылуын оңтайландыру үшін экспрессиялық векторларға негізделген генетикалық құрылымдар алынды. E. coli жасушаларының трансформациясы экспрессия және тазарту жағдайларын оңтайландыру мақсатында жүргізілді, бұл рекомбинантты Cas12a ақуыздарының әртүрлі формаларын алуға мүмкіндік берді. Бағыттаушы РНҚ (крРНҚ) құрастыру және синтездеу жүргізілді. Содан кейін бұл кешендер олардың ДНҚ-ның ыдырау белсенділігін in vitro сынау үшін пайдаланылды. PAM аймағының реттілігі анықталды, сонымен қатар Cas12a эндонуклеазаның әртүрлі субстраттарға қатысты белсенділігін бағалау үшін. Бұл реакция температурасы мен уақытын, реакция компоненттерінің концентрациясын және реакция буферінің құрамын қамтитын биохимиялық реакция үшін оңтайлы жағдайларды таңдауды қамтыды. Гомологиялық модельдеу жүргізілді және Cas12a ферменттерінің мутантты формалары алынды. Бұл ақуыздардың белсенді орталықтарында орналасқан және олардың белсенділігі үшін маңызды аминқышқылдарын анықтауға мүмкіндік берді. Алынған ферменттердің белгілі гомологтары бар ДНҚ ыдырауының ферментативті белсенділігін салыстырмалы бағалау жүргізілді, бұл осы саладағы әрі қарай зерттеулер мен әзірлемелер үшін құнды деректер берді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Наработана рекомбинантная эндонуклеаза Cas12a

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Рекомбинантты эндонуклеаза Cas12a өндірілді

Level of implementation (in Russian) : -

Level of implementation (in Kazakh) : -

Efficiency (in Russian) : -

Efficiency (in Kazakh) : -

Field of application (in Russian) : Фундаментальные знания

Field of application (in Kazakh) : Негізгі білім