The object of research, development or design (in Russian) : Разработка новых нанотел для эффективной нейтрализации и использования в качестве специфического и чувствительного реагента для быстрого обнаружения вируса бешенства.

The object of research, development or design (in Kazakh) : Құтыру вирусын эффективті бейтараптандыратын және оны жылдам анықтауға қажет реагент ретінде пайдалану үшін спецификалық және сезімтал наноантиденелерді жасау.

Aim of work (in Russian) : Экспрессия G-белка вируса бешенства в виде правильно уложенного рекомбинантного белка и оценка антигенности продукта экспрессии.

Aim of work (in Kazakh) : Құтыру вирусының G-белогын кеңісткте дұрыс қатпарланған рекомбинантты белок ретінде экспрессиялау және экспрессия өнімінің антигенділігін бағалау.

Методы исследования (на русском) : Молекулярно-генетические, биохимические и микробиологические методы

Методы исследования (на казахском) : Молекулярлық-генетикалық, биохимиялық және микробиологиялық әдістер

Obtained results and novelty (in Russian) : Проведен компьютерный анализ внеклеточного домена G-белка вируса бешенства (RABV-G). Проведена оптимизация G-белка путем замены гидрофобных аминокислот на линкеры (G4S) между аминокислотными остатками 73–79 и 117–125, а также оптимизированы кодоны и содержания GC для оптимальной экспрессии в дрожжах. кДНК ген ExRABVG-GS, кодирующий RABV-G с сигнальным пептидом на N-конце и с-Мус, 6xHis-тэгами на С-конце, клонирован в вектор pBluescript II SK (+). Сконструирован дрожжевой pGAPZα/ExRABVG-GS вектор, содержащий сигнальный пептид, конститутивный промотор GAP, кДНК ген ExRABVG-GS. Проанализирована экспрессия и секреция G-белка дрожжевым штаммом GS115 P. Pastoris в культуральную среду. Показано методом ДСН-ПААГ электрофореза наличие мажорной белковой полосы с молекулярной массой около 51 кДа, соответствующая G-белку. Проведена очистка белка из трёхдневной культуральной среды методами аффинной и ионнообменной хроматографий. Проведена иммунизация кроликов очищенным рекомбинантным белком и получена поликлональная антисыворотка, содержащая антитела против внеклеточного домена G-белка вируса бешенства. Определены титры полученной антисыворотки с помощью непрямого ИФА метода. Проведено осаждение и очистка поликлональных антител. Проанализированы антигенные характеристики эпитопа G-белка вируса бешенства с помощью непрямого ELISA метода с использованием коммерческих доступных моноклональных антител специфичных к G-белку.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Құтыру вирусының G-белогының (RABV-G) клеткадан тыс доменіне компьютерлік талдау жүргізілді. G-белогының 73–79 және 117–125 жағдайларында орналасқан гидрофобты аминқышқылдарын G4S линкеріне ауыстырдық, сонымен қатар оны ашытқы жүйесінде жақсы экспессияландыру үшін кодондарды пайдалану тұрғысында және GC мөлшеріне қатысты оңтайландырдық. N-соңында сигналдық пептид, ал C-соңында c-Myc және 6xHis-тегтері бар RABV-G кодтайтын ExRABVG-GS кДНК гені pBluescript II SK (+) векторына клондалды. Сигналдық пептид, конститутивті GAP промотор және ExRABVG-GS кДНК гені бар ашытқы жүйесіне аналған pGAPZα/ExRABVG-GS векторы құрастырылды. Рекомбинантты GS115 P. pastoris штаммының G-белокты экспрессиялау және секрециялау қабілеті талданды. Молекулалық салмағы шамамен 51 кДа құрайтын G-белокқа сәйкес белоктың эффективті эксперессияланатыны SDS-PAGE арқылы көрсетілді. G-белогы, үш күндік қоректік ортадан аффиндік және иондық хроматография арқылы тазартылып алынды. Тазартылған рекомбинантты протеинмен қояндар иммунизацияланды және құтыру вирусының G -белогының клеткадан тыс доменіне қарсы поликлоналды антиденелер алынды. Алынған поликлоналды антиденелердің титрлері жанама ИФА әдісі арқылы анықталды. Поликлоналды антиденелерді преципитациялау және тазарту жүргізілді. Қолжетімді коммерциялық антиденелерді пайдаланып, жанама ИФА арқылы G-белоктың антигендік сипаттамалары анықталды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Получен оптимизированный иммуногенный G-белок вируса бешенства, необходимый для получения новых нанотел для эффективной нейтрализации вируса бешенства, имеющие большие перспективы для дальнейшего коммерческого использования.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Құтыру вирусының оңтайландырылған иммуногенді G-белогы алынды, ол құтыру вирусын тиімді бейтараптандыру үшін жаңа наноантиденелерді өндіру үшін қажет, әрі қарай коммерциялық пайдалану үшін үлкен перспективаға ие.

Level of implementation (in Russian) :

Level of implementation (in Kazakh) :

Efficiency (in Russian) : Проведена оптимизация экспрессии G-белка вируса бешенства и рекомбинантный белок очищена с помощью аффинной хроматографии. Выход рекомбинантного белка составил 9 мг/л культуры. Иммунизация и последующее определение антигенных свойств показала, что рекомбинантный G-белок обладает высокой иммуногенностью.

Efficiency (in Kazakh) : Құтыру вирусының G-белогының экспрессиясы оңтайландырылды және рекомбинантты белок аффиндік хроматография арқылы таза кұйде бөлініп алынды. Рекомбинантты белоктың шығымы 9 мг/л құрды. Иммунизация және антигендік қасиеттерін анықтау, рекомбинантты G-белоктың иммуногенділігі жоғары деңгейде екендігін көрсетті.

Field of application (in Russian) : Иммунология, фармакология.

Field of application (in Kazakh) : Иммунология, фармакология.