The object of research, development or design (in Russian) : Ферменты репарации ДНК TagA и Ung

The object of research, development or design (in Kazakh) : ДНҚ репарациясы ферменттері TagA және Ung

Aim of work (in Russian) : Биохимическая характеристика ферментов репарации ДНК M.tuberculosis и H.pylori

Aim of work (in Kazakh) : M. tuberculosis және H. pylori ДНҚ репарациясы ферменттерінің биохимиялық сипаттамасы

Методы исследования (на русском) : Методы молекулярной биологии и генетической инженерии: полимеразная цепная реакция, клонирование генов при помощи ферментов нуклеинового обмена, трансформация бактерий методом температурного шока и электропорационного переноса плазмидной ДНК. Методы ионообменной хроматографии на анионно- и катионно-обменных сорбентах и метало-хелатной (аффинной) хроматографии на ионах никеля Ni2+. Определение нуклеотидной последовательности (сиквенс) по методу Сенгера.

Методы исследования (на казахском) : Молекулярлық биология және гендік инженерия әдістері: полимеразды тізбекті реакция, нуклеин қышқылының метаболизмі ферменттерінің көмегімен гендерді клондау, температуралық соққы арқылы бактерияларды трансформациялау және плазмидті ДНҚ-ның электропорациялық тасымалдануы. Аниондық және катионалмастырғыш сорбенттердегі ионалмастырғыш хроматография және никель иондары Ni2+ метал-хелатты (тұғындылық) хроматографиясының әдістері. Сэнгер әдісімен нуклеотидтер тізбегін (тізбегін) анықтау.

Obtained results and novelty (in Russian) : 3. Была охарактеризована ДНК- субстратная специфичность ферментов TagA и Ung. Для определения репарационной активности в условиях in vitro были использованы 30-мерные субстраты, представляющие собой синтетические олигонуклеотиды, имеющие в 11 положении модифицированные основания – урацил, этеноцитозин, гипоксантин, аналог АП-сайта тетрагидрофуран, 24-мерные субстраты с метилированными гуанином и аденином (dG-24-c5 и dA-24-c5). Олигонуклеотиды были химически модифицированы с 5’ конца флуоресцентными метками – TAMRA (тетраметилродамин) и Сy5. 4. Определены кинетические параметры констант связывания белков TagA и Ung с радиоактивно/флуоресцентно мечеными ДНК-зондами. Определение репарационной активности проводили с помощью реакционного буфера для измерения активности Ung H. pylori, который имел в своем составе 10 нМ TAMRA -меченный олигонуклеотидный дуплекс, 20 мМ Tris–HCl (pH 8,0), 0,1 мг•мл–1 БСА, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ ДТТ. На основе полученных данных были рассчитаны кинетические параметры репарационных активностей: константа Михаэлиса (KM), каталитическая константа (kcat), эффективность действия фермента (kcat/KM). Скрининг условий выполняли с использованием коммерческих растворов из наборов Index HT, PEG/Ion HT компании Hampton Research и ProPlex компании Molecular Dimensions в 96-луночных планшетах методом диффузии в паре «висячей капли» для кристаллизации.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : 3. TagA және Ung ферменттерінің ДНҚ-субстраттық ерекшелігі сипатталды. In vitro жағдайында репарациялық белсенділікті анықтау үшін синтетикалық олигонуклеотидтер болып табылатын 30-мерлі субстраттар пайдаланылды, олардың 11 позициясында модификацияланған негіздері бар – урацил, этеноцитозин, гипоксантин, АП-сайттың аналогы тетрагидрофуран, метилденген гуанин және аденин (dG-24-c5 және dA-24-c5) бар 24-мерлі субстраттар. Олигонуклеотидтер 5' ұшымен флуоресцентті белгілермен химиялық түрлендірілген - TAMRA (тетраметилродамин) және Сy5. 4. TagA және Ung ақуыздарының радиоактивті/ флуоресцентті таңбаланған ДНҚ зондтарымен байланысу тұрақтыларының кинетикалық параметрлері анықталды. Репарациялық белсенділікті анықтау құрамында 10 нМ TAMRA таңбаланған олигонуклеотидті дуплексі, 20 мМ Tris-HCl (РН 8,0), 0,1 мг•мл–1 БСA, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ ДTT болған Ung H. pylori белсенділігін өлшеу үшін реакция буферінің көмегімен жүргізілді. Алынған мәліметтер негізінде жөндеу белсенділігінің кинетикалық параметрлері есептелді: Михаэлис константасы (KM), каталитикалық константасы (kcat), ферменттің әсер ету тиімділігі (kcat/KM). Скрининг шарттары Hampton Research компаниясының Index HT, PEG/Ion HT және Molecular Dimensions компаниясының ProPlex жиынтықтарынан кристалдану үшін "ілулі тамшы" жұбында диффузия әдісімен 96 шұңқырлы планшеттердегі коммерциялық ерітінділерді қолдану арқылы орындалды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : -

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : -

Level of implementation (in Russian) : -

Level of implementation (in Kazakh) : -

Efficiency (in Russian) : -

Efficiency (in Kazakh) : -

Field of application (in Russian) : Фундаментальные исследования

Field of application (in Kazakh) : Негізгі зерттеулер