The object of research, development or design (in Russian) : Иммунореактивные белки T.annulata

The object of research, development or design (in Kazakh) : T. annulata иммунореактивті ақуыздары

Aim of work (in Russian) : Целью проекта является разработка ИФА тест-системы для диагностики тейлериоза КРС и мониторинг экстенсивности инвазии среди животных неблагополучных регионов с оценкой вероятности распространения в благополучные районы

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның мақсаты ІҚМ-дың тейлериозын диагностикалауға арналған ИФТ тест-жүйесін әзірлеу және қолайлы аудандарға таралу ықтималдығын бағалай отырып, қолайсыз өңірлердегі жануарлар арасындағы инвазияның ауқымдылығына мониторинг жүргізу болып табылады

Методы исследования (на русском) : При проведении исследований применялись иммунологические и молекулярно-генетические методы исследований

Методы исследования (на казахском) : Зерттеу барысында иммунологиялық және молекулалық -генетика зерттеу әдістері қолданылды

Obtained results and novelty (in Russian) : В качестве референсного антигена выбрали полиморфный регион белка TaSP. Нуклеотидную последовательность амплифицировали с геномной ДНК T.annulata и клонировали в вектор pET19b. Полученной конструкцией трансформировали клетки XL-Blue. Из клеток положительного по ПЦР-скринингу клона выделяли плазмиду pET19b-TASP, которой трансформировали клетки штамма BL21(DE3). Колонии культивировали до OD600 = 0,6-0,8 и проводили индукцию экспрессии. Клетки центрифугировали, осадок ресуспендировали в буфере Лэммли для SDS-PAGE. При анализе был выявлен клон, гиперэкспрессирующий белок, соответствующий по массе выбранному полиморфному региону TASP. Данный клон инокулировали в среде LB+Amp и индуцировали экспрессию белка. После индукции культуру центрифугировали, осадок хранили при -80°С. Для получения лизата замороженный осадок ресуспендировали в лизис-буфере, к суспензии клеток добавляли лизоцим и инкубировали. Полученный раствор обрабатывали ультразвуком, соникат центрифугировали, а супернатант использовали для дальнейшей очистки с использованием металл-хелатной хроматографии. SDS-PAGE анализ лизата, проскока и фракций элюата показал хороший выход чистых препаратов рекомбинантного белка TASP T. annulata молекулярной массой 30 кДа. Новизна результатов. Создана экспрессионная векторная система и отработан протокол очистки и рефолдинга рекомбинантного поверхностного протеина Theileria annulata (TaSP).

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Референсті антиген ретінде ақуызының полиморфты аймағы TaSP таңдап алынды.Нуклеотидтер тізбегі T. annulata геномдық ДНҚ арқылы күшейтіліп, pET19b векторға лигазасыз әдісімен клондалды. Алынған құрылым көмегімен XL-Blue жасушалары өзгертілді. Алынған құрылым көмегімен XL-Blue жасушалары өзгертілді. Клондардың ПТР-скрининг бойынша оң нәтиже берген жасушаларынан BL21(DE3) штаммының жасушаларын тасымалдаушы pET19b-TASP плазмиасы бөліп алынды. Колониялар OD600 0,6-0,8 дейін дақылданды және экспрессияларға индукция жүргізілді. Жасушаларды центрифугалау арқылы біріктіріп, тұнбасын кейін SDS-PAGE жүргізу үшін Лэммли буферінде қайта сұйылттық. Талдау барысында таңдалған TASP полиморфты аймағының массасына сәйкес келетін гиперэкспрессиялық ақуыз, клон анықталды. Бұл клон LB + Amp ортасына егіліп, ақуыз экспрессиясын тудырды. Дақыл индукциясын центрифугалап, тұнбасы -80°С сақтадық. Мұздатылған тұнба лизис буферінде қайта сұйытылды, жасуша суспензиясына лизоцим қосып, инкубацияланды. Алынған ерітінді ультрадыбыспен өңделді, соника центрифугаланды және супернатант металл-хелатталған хроматографияны пайдалана отырып, одан әрі тазалау үшін пайдаланылды. SDS-PAGE лизаты, тез өту және элюат фракцияларын талдау молекулалық салмағы 30 кДа болатын TASP рекомбинантты ақуызының таза препараттарының жақсы өнімділігін көрсетті. Нәтижелердің жаңалығы: экспрессиялық векторлық жүйе құрылды және Theileria annulata (TaSP) рекомбинантты беткі ақуызды тазарту және қайта өңдеу хаттамасы әзірленді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Получен рекомбинантный поверхностный протеин Theileria annulata (surface protein of T.annulata, TaSP)

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Theileria annulata (surface protein of T. annulata, TaSP) рекомбинантты беткі ақуыз алынды

Level of implementation (in Russian) :

Level of implementation (in Kazakh) :

Efficiency (in Russian) :

Efficiency (in Kazakh) :

Field of application (in Russian) : ветеринария

Field of application (in Kazakh) : ветеринария