The object of research, development or design (in Russian) : Диагностика кронавируса

The object of research, development or design (in Kazakh) : Коронавирус диагностикасы

Aim of work (in Russian) : Целью проекта является разработка ИФА тест-системы для диагностирования инфекционного возбудителя атипичной пневмонии COVID-19 на основе рекомбинантных гликозилированных антигенов RBD и S коронавируса SARS-CoV-2.

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның мақсаты – рекомбинантты гликозилденген RBD және S антигендерінің SARS-CoV-2 коронавирусқа негізделген атипті пневмонияның Сovid-19 инфекциялық қоздырғышын диагностикалау үшін ИФТ тест-жүйесін әзірлеу болып табылады.

Методы исследования (на русском) : Методы генетической инженерии, биохимии, иммунохимии и биотехнологии.

Методы исследования (на казахском) : Генетикалық инженерия, биохимия, иммунохимия және биотехнология әдістері.

Obtained results and novelty (in Russian) : На основании анализа аминокислотной последовательностей указанных белков выбраны фрагменты SpA (59 а.о.) и SpG (197 а.о.), которые по расчетам будут обладать высокой связывающей активностью с антителами IgG млекопитающих. На основании аминокислотной последовательности фрагментов белков SpA и SpG и HRP (Armoracia rusticana) (329 а.о.) синтезирована полная нуклеотидная последовательность гена фьюжен белка SpA/SpG-HRP, которая имела протяженность 2121 п.о. Путем клонирования фрагментов генов SpA, SpG и гена пероксидазы хрена в составе вектора pPICZαA, получена экспрессионная генно-инженерная конструкция pPICZα/SpA-SpG-HRP. Индуцированная 1% метанолом культура продуцировала рекомбинантный конъюгат SpA/SpG-HRP до 120 мкг/мл. Наработана культура рекомбинантного штамма-продуцента конъюгата SpA/SpG-HRP в объеме 200 мл. Индукцию культуру проводили в течение 120 часов путем ежедневной подпитки 1% метанолом в качестве единственного источника углерода. Очистку рекомбинантного белка SpA/SpG-HRP проводили с помощью металлоффинной хроматографии на ионах Ni2+ с использованием Ni-NTA и хроматографическим способом путем элюции градиентом имидазола (50-300 мМ) очищен рекомбинантный конъюгат SpA/SpG-HRP. Полученный рекомбинантный конъюгат SpA/SpG-HRP проверяли на антителосвязывающие свойства на сыворотках крови людей и ферментативную активность на пероксидазу, которая составила 0,25 U/ml (по методу с пирогаллолом). Установлено, что SpA/SpG-HRP связывается с IgG человека в разведении 1/20 000.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Аталған ақуыздардың аминқышқылдарының тізбегін талдау негізінде сүтқоректілердің IgG антиденелерімен жоғары байланыс белсенділігі бар деп есептелген SpA (59 а.қ.) және SpG (197 а.қ.) фрагменттері таңдалады. SpA және SpG ақуыз фрагменттерінің және HRP (Armoracia rusticana) (329 а.қ.) аминқышқылдарының тізбегі негізінде SPA/SpG-HRP ақуызының синтез генінің толық нуклеотидтік тізбегі синтезделді, оның ұзындығы 2121 ж.н. құрайды. PPICZαA векторында SPA, SpG және желкек пероксидаза генінің фрагменттерін клондау арқылы ppiczα/SpA-SpG-HRP экспрессиялық гендік инженерия дизайны алынды. 1% метанол қосу арқылы промоторды белсендіру арқылы SPA/SpG-HRP ақуызының синтез генінің экспрессиясына қол жеткізілді, оның деңгейі 120 мкг/мл болды. 200 мл көлемінде SPA/SpG-HRP конъюгатының рекомбинантты штамм-продуцентінің дақылы жасалды. Жалғыз көміртегі көзі ретінде 1% метанолмен күнделікті азықтандыру арқылы 120 сағат бойы культура индукцияланды. Рекомбинантты SPA/SpG-HRP ақуызын тазарту NI-NTA көмегімен NI2+ иондарында металлофин хроматографиясы арқылы және имидазол градиентімен элюция арқылы хроматографиялық әдіспен жүргізілді (50-300 мМ) рекомбинантты SpA/SpG-HRP конъюгаты тазартылды. Алынған рекомбинантты SpA/SpG-HRP конъюгаты адамдардың қан сарысуындағы антиденелерді байланыстыратын қасиеттерге және 0,25 U/ml (пирогаллол әдісі бойынша) пероксидазадағы ферментативті белсенділікке тексерілді. SPA/SpG-HRP 1/20 000 өсіру бөлігінде адамның IgG-мен байланысатыны анықталды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Получен штамм P. pastoris продуцент химерного белка SPA/SpG-HRP. Продуцируемый рекомбинантный белок SPA/SpG-HRP показал высокую специфичность к антителам млекопитающих.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Химиялық ақуыз өндірушісі продуцент P. Pastoris SPA/SpG-HRP штаммы алынды. Өндірілген рекомбинантты SPA/SpG-HRP ақуызы сүтқоректілердің антиденелеріне жоғары ерекшелігін көрсетті.

Level of implementation (in Russian) : Проект находится на стадии выполнения

Level of implementation (in Kazakh) : Жоба орындалу сатысында

Efficiency (in Russian) : Высокая

Efficiency (in Kazakh) : Жоғары

Field of application (in Russian) : Диагностика

Field of application (in Kazakh) : Диагностика