The object of research, development or design (in Russian) : РНК, выделенная из крови овец (Ovis aries) и гомогенатов мокрецов рода Culicoides, нуклеиновые кислоты вируса блютанга (BTV), клетки бактерий Escherichia coli штамма DE3.

The object of research, development or design (in Kazakh) : Қой қанынан (Ovis aries) және құмыты Сulicoides тұқымдасының гомогенаттарынан, блютанг вирусының (BTV) нуклеин қышқылдарынан, DE3 штаммының Escherichia coli бактерияларының жасушаларынан оқшауланған РНҚ.

Aim of work (in Russian) : Провести генетическую характеризацию изолятов вируса блютанга, выявляемых в Казахстане, и разработать отечественную тест-систему на основе ПЦР в реальном времени для их дифференциальной детекции.

Aim of work (in Kazakh) : Қазақстанда анықталған блютанг вирусының изоляттарын генетикалық сипаттау және оларды дифференциалды анықтау үшін нақты уақыттағы ПТР негізінде отандық тест-жүйені әзірлеу.

Методы исследования (на русском) : Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей, ВЭЖХ, выделение РНК, обратная транскрипция, ПЦР, электрофорез нуклеиновых кислот, секвенирование ДНК по Сэнгеру, филогенетический анализ, методы молекулярного клонирования, транскрипция in vitro, спектрофотометрический анализ нуклеиновых кислот, статистический анализ данных.

Методы исследования (на казахском) : Нуклеотидтер тізбегін компьютерлік талдау, ӨЖСХ, РНҚ оқшаулау, кері транскрипция, ПТР, нуклеин қышқылының электрофорезі, Сенгер ДНҚ секвенциясы, филогенетикалық талдау, молекулалық клондау әдістері, in vitro транскрипция, нуклеин қышқылының спектрофотометриялық талдауы, статистикалық деректерді талдау.

Obtained results and novelty (in Russian) : Из десяти ОТ-ПЦР положительных образцов выделены тотальные препараты РНК, проведена реакция обратной транскрипции с использованием высокопродуктивной ревертазы Superscript IV. С этих десяти образов синтезированной кДНК получены амплификаты с использованием высокоточной ДНК-полимеразы (сегменты 2 и 10). Проведена генетическая характеризация изолятов вируса блютанга по частично секвенированным Seg-2 и Seg-10 с последующим проведением филогенетического анализа. По обоим локусам все образцы кластеризовались с образцами генотипов вируса BTV-9W. Для одного из изолятов вируса проведено частичное секвенирование всего генома (всех десяти сегментов РНК). Реассортмента не выявлено: все сегменты генетически ближе всего оказались к вакцинным штаммам топотипа BTV-9W. Разработаны, синтезированы и очищены праймеры и пробы для детекции РНК BTV всех серотипов по локусу Seg10 и дифференциальной диагностики РНК-сегмента Seg-2 топотипа BTV-9W методом ПЦР в реальном времени (RT-qPCR). Проведено клонирование участка сегмента Seg2 и фрагмента ДНК, соответствующего полнодлинному сегменту Seg10 BTV-9W в экспрессионный вектор pET23c. Проведен рестрикционный и ПЦР-анализ клонов для подтверждения наличия в плазмидах требуемых вставок ДНК. Сконструированные плазмиды T7-BTV-9WSeg2[1595-2564]_pET23c и T7-BTV-9WSeg10[1-803]_pET23c были линеаризованы по сайтам SalI и SacI соответственно, после чего методом транскрипции in vitro с них проведен синтез контрольных РНК для тест-системы.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Жалпы РНҚ препараттары он RT-ПТР оң үлгілерінен бөлініп алынды және жоғары өнімді Superscript IV жинағымен кері транскрипция реакциясы орындалды. Синтезделген кДНҚ-ның осы он үлгісінен жоғары дәлдіктегі ДНҚ-полимеразаның көмегімен амплификат алынды (2 және 10 сегменттер). Ішінара секвенирленген Seg-2 және SG-10 бойынша блютанг вирусының изоляттарына генетикалық сипаттама жасалды, содан кейін филогенетикалық талдау жүргізілді. Екі локуста да барлық үлгілер BTV-9W вирусының генотиптік үлгілерімен кластерленген. Вирустың изоляттарының бірі үшін бүкіл геномды (РНҚ-ның барлық он сегментін) ішінара секвенирлеу жүргізілді. Қайта ассортимент анықталған жоқ: барлық сегменттер генетикалық тұрғыдан BT-9W топотипінің вакцина штамдарына жақын болды. Seg10 локусы бойынша барлық серотиптердің BTV РНҚ-сын анықтау және нақты уақыттағы ПТР (RT-qPCR) әдісімен BTV-9W топотипінің Seg-2 РНҚ сегментінің дифференциалды диагностикасы үшін праймерлер мен сынамалар әзірленді, синтезделді және тазартылды. Seg2 сегментінің учаскесін және PET23C экспрессиялық векторына Seg 10 BT-9W толық ұзын сегментіне сәйкес келетін ДНҚ фрагментін клондау жүргізілді. ПЛАЗМИДАЛАРДА қажетті ДНҚ кірістірулерінің болуын растау үшін клондарды шектеу және ПТР талдауы жүргізілді. Құрастырылған T7-BTV-9WSeg2 плазмидалары [1595-2564]_pET23c және T7-BTV-9WSeg10[1-803]_pet23c сәйкесінше Sall және SacI сайттары бойынша сызықты болды, содан кейін сынақ жүйесі үшін бақылау РНҚ синтезі in vitro транскрипция әдісімен жүргізілді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : - Нуклеотидные последовательности секвенированных участков сегментов 2 и 10 BTV, полученные от десяти ОТ-ПЦР положительных животных, выложены в базу данных NCBI, им присвоены номера GenBank: OM307411 - OM307420 (сегмент 10) и номера OM307421 - OM307430 (сегмент 2). - Построены филогенетические деревья по сегментам 2 и 10 BTV с секвенированными участками генома отечественных изолятов BTV. - На базе экспрессионного вектора E. coli pET23c сконструированы плазмиды положительных контролей тест-системы: T7-BTV-9WSeg2[1595-2564]_pET23c и T7-BTV-9WSeg10[1-803]_pET23c.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Он RT-PCR оң жануарынан алынған 2 және 10 BTV сегменттерінің реттелген бөліктерінің нуклеотидтер тізбегі NCBI дерекқорына жүктелді және GenBank нөмірлері тағайындалды: OM307411 - OM307420 (сегмент 10) және OM307474ment (OM3030gse) сандары. BTV 2 және 10 сегменттері үшін отандық BTV изоляттарының геномдық аймақтары реттелген филогенетикалық сызықтары салынды. E. coli pET23c экспрессиялық векторы негізінде тест жүйесінің оң бақылау плазмидалары құрастырылған: T7-BTV-9WSeg2[1595-2564]_pET23c және T7-BTV-9WSeg10[1-803]_pET23c.

Level of implementation (in Russian) : Не внедрено.

Level of implementation (in Kazakh) : Енгізілмеген.

Efficiency (in Russian) : Все запланированные работы выполнены в срок.

Efficiency (in Kazakh) : Барлық жоспарланған жұмыстар уақытында орындалды.

Field of application (in Russian) : Эпидемиология, диагностика в сельском хозяйстве.

Field of application (in Kazakh) : Эпидемиология, ауыл шаруашылығындағы диагностика.