Inventory number IRN Number of state registration
0321РК00268 AP09260668-KC-21 0121РК00161
Document type Terms of distribution Availability of implementation
Краткие сведения Gratis Number of implementation: 0
Not implemented
Publications
Native publications: 0
International publications: 0 Publications Web of science: 0 Publications Scopus: 0
Patents Amount of funding Code of the program
0 18387535 AP09260668
Name of work
Изучение генетического разнообразия вируса SARS-CoV-2 в Казахстане.
Type of work Source of funding Report authors
Fundamental Сытник Игорь Иванович
0
0
0
0
Customer МНВО РК
Information on the executing organization
Short name of the ministry (establishment) МНВО РК
Full name of the service recipient
Товарищество с ограниченной ответственностью "Национальный центр биотехнологии"
Abbreviated name of the service recipient ТОО "Национальный центр биотехнологии"
Abstract

Объектами исследования являлись образцы РНК выделенные изнозофарингиальных смывов пациентов с установленным диагнозом COVID-19.

Зерттеу нысаны болып, COVID-19 диагнозы қойылған науқастардан алынған жұтқыншақ шайындысының РНҚ үлгілері табылады.

Цель проекта: изучить генетическое разнообразие вируса SARS-Cov-2 в Казахстане методом полногеномного секвенирования.

Жобаның мақсаты: Толықгеномды секвенерлеу әдісі бойынша Қазақстандағы SARS-Cov-2 вирусының генетикалық әралуандылығын зерттеу.

Поставленная цель и вытекающие из нее задачи были выполнены с использованием молекулярно-генетических и информационных методов.

Алға қойылған мақсаттар мен одан туындайтын міндеттер молекулалық-генетикалық және ақпараттық әдістерді қолдану арқылы жүзеге асырылды.

В результате проведенных исследований были подобраны 39 пар праймеров, которые позволяют амплифицировать весь геном фрагментами до 1200 п.н с перекрытием не менее 100 п.н. Подобранные праймеры при проверке в PrimerBLAST не образовывали тугоплавкиедимеры с залипшими 3‘ концами, имели одинаковую температуру отжига и высокую расчетную эффективность.С использованием данных праймеров были оптимизированы условия постановки ПЦР и разработан протокол полногеномной амплификации вируса SARS-CoV-2 с использованием 3 мультиплексных реакций и одношаговой ОТ-ПЦР. Начаты работы по формированию коллекции образцов РНК от пациентов с установленным диагнозом COVID-19cанамнезом течения инфекции. Всего собрано 30 образцов. Образцы РНК были использованы для полногеномной амплификации с использованием разработанного протокола, а также для последующего секвенирования на NGSсеквенатореMiSeq. Были получены полногеномные последовательности 30 образцов вируса SARS-CoV-2. Получены результаты распределения генотипов вируса SARS-CoV-2 в 2021 году в различных регионах Казахстана, и определены особенности циркулирующих генотипов в сравнение с мировыми данными. Выявлены ассоциации с течением болезни и генотипом. Новизна результатов: подобраны праймеры и раработанпротокл полногеномного секвенирования SARS-CoV-2, получены полногеномные последовательности.

Зерттеулер нәтижесінде кем дегенде 100 ж. н. қабаттастыра отырып, 1200 ж.н. дейінгі фрагментті бүкіл геномды амплификациялауға мүмкіндік беретін, 39 жұп праймер таңдап алынды. Таңдап алынған праймерлерді PrimerBLAST-та тексері кезінде 3' жабысқақ ұштары бар қиын балқитын димерлер түзілмеді, праймерлер бірдей жану температурасы мен жоғарғы есептік тиімділікке ие болды. Осы праймерлерді қолдану барысында 3 мультиплексті реакцияны және бір қадамды КТ-ПТР қолдана отырып, ПТР қою жағдайы оңтайландырылды және SARS-CoV-2 вирусын толықгеномды амплификациялау хаттамасы әзірленді. Инфекция тарихы бар, COVID-19 диагнозы қойылған науқастардан РНҚ үлгілерінің коллекциясын қалыптастыру жұмыстары басталды. Барлығы 30 үлгі жинақталды. РНҚ үлгілері әзірленген хаттаманы қолдана отырып толықгеномды амплификация жүргізу үшін, сонымен қатар, NGS MiSeq секвенаторында кезекті секвенирлеуге қолданылды. SARS-CoV-2 вирусының 30 үлгісі үшін толықгеномды бірізіділіктер алынды. 2021 жылы SARS-CoV-2 вирусының генотиптерін Қазақстанның әртүрлі өңірлерінде тарату нәтижелері алынды және айналымдағы генотиптерді әлемдік деректермен салыстыру ерекшеліктері айқындалды. Ауру өтуінің және генотиптің ассоциациялары анықталды. Нәтижелердің жаңашылдығы: SARS-CoV-2 толықгеномды секвенирлеу праймерлері таңдап алынды және хаттамасы әзірленді, толықгеномды бірізділігі алынды.

Реализация проекта позволит освоит элементы молекулярно-генетического мониторинга с анализом полногеномных данных вирусов. Данный подход обладает максимальной разрешающей способностью и может быть перенесен на любой патоген.

Жобаны іске асыру вирустардың толық геномдық деректерін талдай отырып, молекулалық-генетикалық мониторинг элементтерін игеруге мүмкіндік береді. Бұл тәсіл максималды ажыратымдылыққа ие және кез-келген патогенге қолданылуы мүмкін.

Результаты проекта могут быть использованы клиническими врачами при эпидемиологическом контроле коронавирусной инфекцией в Казахстане. Результаты могут быть использованы в модернизации подхода в борьбе с вирусом.

Жоба нәтижелерін дәрігерлер Қазақстандағы коронавирустық инфекцияны эпидемиологиялық бақылауда қолдана алады. Нәтижелерді вируспен күресу тәсілдерін жаңарту үшін пайдалануға болады.

Разработанный протокол позволяет проводить амплификацию вируса SARS-CoV-2 с использованием 39 пар праймеров.

Әзірленген хаттама 39 жұп праймерді қолдана отырып, SARS-CoV-2 вирусын амплифицирлеуге мүмкіндік береді.

Эпидемиология, контроль за особо опасными инфекциями.

Эпидемиология, аса қауіпті инфекцияларға бақылау жасау.

UDC indices
578.53
International classifier codes
34.25.00;
Key words in Russian
SARS-CoV-2; генотипирование; полногеномное секвенирование; эпидемиология; филогения;
Key words in Kazakh
SARS-CoV-2; генотипирлеу; толықгеномды секвенирлеу; эпидемиология; филогения;
Head of the organization Раманкулов Ерлан Мирхайдарович Ph.D / Профессор
Head of work Сытник Игорь Иванович Кандидат ветеринарных наук / нет