The object of research, development or design (in Russian) : Антигены короновируса SARS-CoV-2

The object of research, development or design (in Kazakh) : SARS-CoV-2 коронавирустын антигендері

Aim of work (in Russian) : Целью проекта является разработка ИФА тест-системы для диагностирования инфекционного возбудителя атипичной пневмонии COVID-19 на основе рекомбинантных гликозилированных антигенов RBD и S коронавируса SARS-CoV-2.

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның мақсаты – рекомбинантты гликозилденген RBD және S антигендерінің SARS-CoV-2 коронавирусқа негізделген атипті пневмонияның Сovid-19 инфекциялық қоздырғышын диагностикалау үшін ИФТ тест-жүйесін әзірлеу болып табылады.

Методы исследования (на русском) : Методы генетической инженерии, биохимии, иммунохимии и биотехнологии.

Методы исследования (на казахском) : Генетикалық инженерия, биохимия, иммунохимия және биотехнология әдістері.

Obtained results and novelty (in Russian) : Компетентные клетки Pichia pastoris электропорировали трансформационной кассетами pPICZα/S и pPICZα/RBD. Хромосомную ДНК клонов-трансформантов дрожжей анализировали ПЦР-скринингом с S и RBD-специфичными праймерами. Положительные клоны секвенировали для проверки на отсутствие мутаций. Было выбрано по 5 клонов каждого продуцента. Проверку продуцирующей способности осуществляли путем культивирования клонов-кандидатов. Проводилась оптимизация условий культивирования штаммов-продуцентов P.pastoris_pPICZα/S и P.pastoris_pPICZα/RBD. В результате установлено, что оптимальной средой является среда: 1% дрожжевой экстракт, 2% пептон, 1% метанол (рН 6,0); температура культивирования 30ºС; время культивирования 120 часов. Выделение антигенов S и RBD из индуцированной дрожжевой культуры проводили высаливанием, высокоскоростным центрифугированием и ультрафильтрацией. Очистку осуществляли катионобменной хроматографией на SP Sepharose в комбинации с гидрофобной хроматографией на бутиловой колонке при рН 7,2. Гликозилирование секреторных белков-антигенов S и RBD подтверждали дегликолизированием с EndoH в сочетании с электрофорезом. Антигенные свойства очищенных S и RBD белков проверяли методом иммуноферментного анализа на 47 сыворотках людей с подтвержденным (с помощью ПЦР) диагнозом - коронавирус SARS-CoV-2. Оптимальные концентрации антигенов RBD и S составили 2,5 мкг/мл и 1 мкг/мл, соответственно. Конечная точка титрования составила разведение от 1/400 до 1/3200.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Pichia pastoris компетентті жасушалары pPICZα/S және pPICZα/RBD трансформациялық кассеталарын электропорациялады. Ашытқы трансформаторларының хромосомалық ДНҚ-сы S және RBD-ге тән праймерлермен ПТР скринингімен талданды. Мутацияның болмауын тексеру үшін оң клондар реттелді. Әр өндірушінің 5 клоны таңдалды. Өндіріс қабілетін тексеру кандидат клондарды өсіру арқылы жүргізілді. P. pastoris_ppiczα/S және P. pastoris_pPICZα/RBD өндіруші штамдарын өсіру жағдайларын оңтайландыру жүргізілді. Нәтижесінде қоршаған орта оңтайлы орта екендігі анықталды: 1% ашытқы сығындысы, 2% пептон, 1% метанол (рН 6,0); өсіру температурасы 30ºС; өсіру уақыты-120 сағат. Индукцияланған ашытқы культурасынан S және RBD антигендерін бөлу жоғары жылдамдықты центрифугалау және ультрафильтрация арқылы жүргізілді. Тазарту sp Sepharose-де катион алмасу хроматографиясымен рН 7,2 кезінде бутил бағанындағы гидрофобты хроматографиямен біріктіріліп жүзеге асырылды. S және RBD секреторлық антиген ақуыздарының гликозиляциясы электрофорезбен бірге EndoH-мен дегликолизденумен расталды. Тазартылған S және RBD ақуыздарының антигендік қасиеттері SARS - CoV-2 коронавирусының расталған (ПТР көмегімен) диагнозы бар адамдардың 47 сарысуында иммуноферменттік талдау әдісімен тексерілді. RBD және S антигендерінің оңтайлы концентрациясы тиісінше 2,5 мкг/мл және 1 мкг/мл құрады. Титрлеудің соңғы нүктесі 1/400-ден 1/3200-ге дейін сұйылту болды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Получены штаммы P.pastoris_pPICZα/S и P.pastoris_pPICZα/RBD, продуцирующие рекомбинантные белки S и RBD коронавируса SARS CoV 2, обладающие антигенной активностью к сывороткам людей с подтвержденным диагнозом COVID-19.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : P. pastoris_ppiczα/S және P. pastoris_pPICZα/RBD штамдары алынды, олар SARS CoV 2 коронавирусының рекомбинантты ақуыздарын шығарады, COVID-19 диагнозы расталған адамдардың сарысуларына антигендік белсенділігі бар.

Level of implementation (in Russian) : Проект находится на стадии выполнения

Level of implementation (in Kazakh) : Жоба орындалу сатысында

Efficiency (in Russian) : Высокая

Efficiency (in Kazakh) : Жоғары

Field of application (in Russian) : Диагностика, биотехнология

Field of application (in Kazakh) : Диагностика, биотехнология