The object of research, development or design (in Russian) : Ферменты репарации ДНК TagA и Ung

The object of research, development or design (in Kazakh) : ДНҚ репарациясы ферменттері TagA және Ung

Aim of work (in Russian) : Биохимическая характеристика ферментов репарации ДНК M.tuberculosis и H.pylori

Aim of work (in Kazakh) : M. tuberculosis және H. pylori ДНҚ репарациясы ферменттерінің биохимиялық сипаттамасы

Методы исследования (на русском) : Методы молекулярной биологии и генетической инженерии: полимеразная цепная реакция, клонирование генов при помощи ферментов нуклеинового обмена, трансформация бактерий методом температурного шока и электропорационного переноса плазмидной ДНК. Методы ионообменной хроматографии на анионно- и катионно-обменных сорбентах и метало-хелатной (аффинной) хроматографии на ионах никеля Ni2+. Определение нуклеотидной последовательности (сиквенс) по методу Сенгера.

Методы исследования (на казахском) : Молекулярлық биология және гендік инженерия әдістері: полимеразды тізбекті реакция, нуклеин қышқылының метаболизмі ферменттерінің көмегімен гендерді клондау, температуралық соққы арқылы бактерияларды трансформациялау және плазмидті ДНҚ-ның электропорациялық тасымалдануы. Аниондық және катионалмастырғыш сорбенттердегі ионалмастырғыш хроматография және никель иондары Ni2+ метал-хелатты (тұғындылық) хроматографиясының әдістері. Сэнгер әдісімен нуклеотидтер тізбегін (тізбегін) анықтау.

Obtained results and novelty (in Russian) : Получены гены ферментов репарации клинически важных бактерий Mycobacterium tuberculosis (tagA) и Helicobacter pylori (ung). Протяженность гена tagA составила 615 п.о., у ung – 702 п.о. Амплификация генов проведена из геномной ДНК Helicobacter pylori B128 (GenBank: CP024951.1) и Mycobacterium tuberculosis H37Rv (GenBank: AP024671.1). Гены были клонированы в экспрессионный вектор pET28c(+) по сайтам рестрикции NdeI и BamHI под контроль Т7-промотора, который обеспечивает высокую экспрессию целевого гена. Секвенирование клонов подтвердило отсутствие мутаций в рамке считывания, в результате были получены экспрессионные вектора pET28c/MtbTagA и pET28c/HpUng. С помощью методов секвенирования экспериментально подтверждено отсутствие мутаций в виде делеций, вставок и замен. Полученными векторами pET28c/MtbTagA и pET28c/HpUng были трансформированны компетентные клетки различных штаммов Е.coli ArcticExpress (DE3)RP, BL-21 (DE3) и Rosetta 2 (DE3) для проверки индукции. Все трансформированные штаммы показали способность продуцировать рекомбинантные белки TagA и Ung. Для экспрессии и наработки рекомбинантного белка TagA был выбран штамм BL-21 (DE3). Оптимальным штаммом Е.coli для наработки рекомбинантного белка Ung оказался ArcticExpress (DE3)RP.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Клиникалық маңызды Mycobacterium tuberculosis (tagA) және Helicobacter pylori (ung) бактериялырдың репарация ферменттері гендері алынды. tagA генінің ұзыңдығы 615 н.қ., ung - 702 н.қ. Гендердің амплификациясы Helicobacter pylori B128 (GenBank: CP024951.1) және Mycobacterium tuberculosis H37Rv (GenBank: AP024671.1) геномдық ДНҚ-сынан алынды. Гендер pET28c(+) экспрессиялық векторға NdeI және BamHI рестрикция сайттарымен негізгі генның жоғарғы деңгейдегі экспрессиясын қамтамасыз ететін Т7-промотор негізінде клондалды. Клондардың сиквенсі мутациялардың жоқтыңын дәлелдедіғ нәтижесінде pET28c/MtbTagA және pET28c/HpUng экспрессиялық векторлар алынды. Секвенст тәсілдері арқылы тәжірибе жүзінде делеция, қосынды және орын ауысу мутацияларының жоқтығы дәлелденді. Барлық трансформацияланған штаммдар TagA және Ung рекомбинатты ақуыздарын продуциялау қабілетін көрсетті. Экспрессия және TagA рекомбинатты ақуызын алу үшін BL-21 (DE3) штаммы алынды. Ung рекомбинатты ақуызын алу үшін ArcticExpress (DE3)RP штаммы таңдалды. Ақуыз индукциясы үшін тиімді жағдайлары төмендегідей: 16 сағаттық индукция, концентрациясы 0,2 мМ ИПТГ (изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид), бөлме температурасы, 100 айналым/минутына. Осы жағдайлар біріклік бактериялық ортадан ең көп мөлшердегі рекомбинантты ақуыз адуға мүмкіндік береді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : -

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : -

Level of implementation (in Russian) :

Level of implementation (in Kazakh) :

Efficiency (in Russian) :

Efficiency (in Kazakh) :

Field of application (in Russian) : Фундаментальные исследования

Field of application (in Kazakh) : Негізгі зерттеулер