The object of research, development or design (in Russian) : Объектом исследования является иммунохроматографическая тест-система для диагностики нодулярного дерматита крупного рогатого скота

The object of research, development or design (in Kazakh) : Зерттеу объектісі ірі қара малдың нодулярлық дерматит ауруын диагностикалауға арналған иммунохроматографиялық тест жүйесі.

Aim of work (in Russian) : Целью исследования на 2021 год является получение штаммов микроорганизмов, продуцирующих рекомбинантный Р32 антиген вируса нодулярного дерматита, а также отработка параметров выделения и очистки белка.

Aim of work (in Kazakh) : 2021 жылға арналған зерттеудің мақсаты – нодулярлық дерматит вирусының рекомбинантты P32 антигенін өндіретін микроорганизмдердің штаммдарын алу, сондай-ақ ақуызды бөліп алу және тазарту әдістерін нақтылау.

Методы исследования (на русском) : В ходе выполнения проекта использовались методы молекулярной и генетической инженерии, иммунологические, а также биотехнологические методы исследования.

Методы исследования (на казахском) : Жобаны жүзеге асыру барысында молекулалық-гендік инженерия әдістері, иммунологиялық және биотехнологиялық зерттеу әдістері қолданылды.

Obtained results and novelty (in Russian) : Получена генетическая конструкция на основе коммерческого вектора pGEM-T, несущая ген Р32 антигена в условиях de novo. Анализ результатов секвенирования показал полное совпадение полученной последовательности с последовательностью кодирующей ген Р32 антигена вируса нодулярного дерматита КРС. Получены генетические конструкции на основе экспрессионных векторов рЕТ28 и рЕТ32 несущие ген Р32 антигена вируса нодулярного дерматита. Рестриктный анализ показал наличие фрагментов ДНК длиной около 800 пар оснований, что соответствует ожидаемому результату. В результате оптимизации параметров культивирования штаммов микроорганизмов, продуцирующих рекомбинантный Р32, было установлено, что наиболее оптимальная концентрация ИПТГ для экспрессии белка составляет 0,1 мМ. При этом, необходимо отметить, что повышение концентрации ИПТГ, снижает его экспрессию. Установлено, что наиболее оптимальной температурой для экспрессии рекомбинантного белка является комнатная температура (25°С), оптимальное время инкубации - 5-6 часов. Полученные штаммы продуцируют рекомбинантные белки с молекулярной массой около 32 кДа и 48 кДа для конструкций на основе вектора рЕТ28 и рЕТ32 соответственно. Результаты масс-спектрометрии подтвердили наличие Р32 антигена вируса нодулярного дерматита. Отработаны методы выделения и очистки рекомбинантного Р32 антигена вируса нодулярного дерматита . Концентрация мочевины 8 М, концентрация имидазола при элюировании белка из колонки Ni-сефарозы - 200 мМ.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : De novo жағдайында P32 антиген генін тасымалдайтын pGEM-T коммерциялық векторы негізінде генетикалық конструкция алынды. Секвенерлеу негізінде нәтижелер ірі қара малдың нодулярлық дерматит вирусының антигенінің Р32 генін кодтайтын реттілікпен алынған тізбектің толық сәйкестігін көрсетті. Нодулярлық дерматит вирусының антигенінің P32 генін тасымалдаушы pET28 және pET32 экспрессия векторларына негізделген генетикалық конструкциялар алынды. Рестрикциялық талдау күтілетін нәтижеге сәйкес келетін ұзындығы шамамен 800 негізгі жұп ДНҚ фрагменттерінің болуын көрсетті. Р32 рекомбинантты микроорганизм штаммдарын өсіру параметрлерін оңтайландыру нәтижесінде белок экспрессиясы үшін IPTG ең оңтайлы концентрациясы 0,1 мМ болатыны анықталды. Сонымен қатар, IPTG концентрациясының жоғарылауы оның экспрессиясын төмендететінін атап өткен жөн. Рекомбинантты ақуыздың экспрессиясы үшін ең оңтайлы температура бөлме температурасы (25°С), ал оңтайлы инкубация уақыты 5-6 сағат екені анықталды. Алынған штаммдар сәйкесінше pET28 және pET32 векторларына негізделген конструкциялар үшін молекулалық салмағы шамамен 32 кДа және 48 кДа болатын рекомбинантты ақуыздарды шығарады. Масс-спектрометрия нәтижелері нодулярлық дерматит вирусының Р32 антигенінің болуын растады. Нодулярлық дерматит вирусының рекомбинантты Р32 антигенін бөліп алу және тазарту әдістері әзірленді. Мочевина концентрациясы 8 М, Ni-сефарозы бағанынан ақуыздың элюция кезіндегі имидазол концентрациясы 200 мМ.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Штамм микроорганизмов, продуцирующий рекомбинантный Р32 антигена вируса нодулярного дерматита с молекулярной массой около 48 кДа, обладает высокой продуктивностью.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Молекулярлық салмағы шамамен 48 кДа болатын нодулярлық дерматит вирусының рекомбинантты P32 антигенін өндіретін микроорганизмдердің штаммы жоғары өнімділік көрсетеді.

Level of implementation (in Russian) : Проект находится на стадии выполнения

Level of implementation (in Kazakh) : Жоба орындалуда

Efficiency (in Russian) : Эффективность разработки определяется продуктивными характеристиками штамм-продуцента.

Efficiency (in Kazakh) : Дамудың тиімділігі продуцент штаммының өнімді сипаттамаларымен анықталады.

Field of application (in Russian) : Ветеринария

Field of application (in Kazakh) : Ветеринария