The object of research, development or design (in Russian) : Объектом исследования являются рекомбинантные белки BAP-X и BirA-Y, где X, Y - Sox2, Oct4, Nanog и GFP.

The object of research, development or design (in Kazakh) : Зерттеу объектісі: BAP-X және BirA-Y, X, Y - Sox2, Oct4, Nanog және GFP рекомбинантты ақуыздар болып табылады

Aim of work (in Russian) : Целью проекта является разработка метода точного количественного анализа взаимодействий in vivo транскрипционных факторов плюрипотентности Sox2, Oct4, Nanog в ядрах эукариотических клеток человека с применением метода биотинилирования от сближения (PUB) и масс-спектрометрии

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның мақсаты, жақындаудың арқасында биотинилирлеу (PUB) мен масс-спектрометрия әдісін қолдана отырып, адамның эукариотикалық жасушаларының ядроларындағы Sox2, Oct4, Nanog плюрипотенттіліктің in vivo факторларының өзара іс-әрекеттерін дәлме дәл сандық талдау әдісін әзірлеп шығару болып табылады.

Методы исследования (на русском) : Методы исследования: В работе были использованы молекулярно-биологические, биохимические, генетические методы анализа, а также масс-спектрометрия.

Методы исследования (на казахском) : Жұмыстың әдістері: Жұмыста молекулярлы-биологиялық, биохимиялық, генетикалық талдау әдістері және масс-спектрометрия қолданылды.

Obtained results and novelty (in Russian) : Полученные результаты и их новизна: Получены, секвенированы и наработаны одиннадцать новых плазмидных конструкции. Оптимизированы условия трансфекции, при этом установлено, что его эффективность с примением фосфата кальция не уступает и даже является более эффективной по сравнению с трансфекцией липофектамином и FuGENE. При проведении транзиентной трансфекции показано, что использование плазмид pOz-BirA-Y вместо pcDNA3.1(+)-BirA-Y (где Y Sox2, Oct4, Nanog и GFP), позволяет получить большую (в пределах одного порядка) разницу уровня биотинилирования в эксперименте в сравнении с контролем. Кроме того установлено, что использование диализованной сыворотки в экспериментах по трансфекции, позволяет уменьшить фоновый уровень биотинилирования. С применением метода MRM, сделана относительная количественная оценка биотинилированных и небиотинилированных BAP-пептидов в образцах BAP-Sox2+BirA-Oct4 с различным временем мечения биотином (9 ч против 3 ч).

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Жұмыстың нәтижелері және жаңалығы: Он бір жаңа плазмид құрылымдары алынды, жүйеленді және әзірленді. Трансфекция шарттары оңтайландырылды, бұл ретте оның кальций фосфатын қабылдаудағы тиімділігі липофектамин мен FuGENE трансфекциясымен салыстырғанда кем түспейтіні және одан да тиімді болып табылатыны анықталды. Транзиенттік трансфекция жүргізу кезінде pcDNA3.1(+)-BirA-Y орнына pOz-BirA-Y плазмидтерін пайдалану (мұнда Y Sox2, Oct4, Nanog және GFP) бақылаумен салыстырғанда экспериментте биотинилдеу деңгейінің үлкен (бір тапсырыс шегінде) айырмашылығын алуға мүмкіндік беретіні көрсетілген. Бұдан басқа, трансфекция бойынша эксперименттерде диализделген сарысуды пайдалану биотинилденудің фондық деңгейін азайтуға мүмкіндік беретіні анықталды. MRM әдісін қолдана отырып, BAP-Sox2+BirA-Oct4 үлгілерінде биотинилденген және биотинилденбеген BAP-пептидтерге биотинмен таңбалаудың әртүрлі уақыттарымен (3 сағатқа қарсы 9 сағат) салыстырмалы сандық бағалау жүргізілді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : С помощью метода SILAC с использованием стабильных изотопов получены результаты количественного анализа in vivo белок-белковых взаимодействий транскрипционных факторов плюрипотентности. Установлено, что уровень биотинилирования, являющийся результатом этих взаимодействий в образцах содержащих пары BAP-Sox2+BirA-Oct4 и BAP-Nanog+BirA-Sox2 намного превышает (величина двух порядков) уровень биотинилирования в контрольных образцах BAP-GFP+BirA-Oct4 и BAP-GFP +BirA-Sox2.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Тұрақты изотоптарды қолдана отырып, SILAC әдісін қолдана отырып, плурипотенттіліктің транскрипциялық факторларының ақуыз-ақуыздың өзара әрекеттесуін in vivo сандық талдау нәтижелері алынды. BAP-Sox2+BirA-Oct4 және BAP-Nanog+BirA-Sox2 жұптары бар үлгілердегі биотинилдену деңгейі BAP-GFP+BirA-Oct4 және BAP-GFP+BirA-Sox2 бақылау үлгілеріндегі биотинилдену деңгейінен әлдеқайда (екі реттік шамасы) жоғары екендігі анықталды.

Level of implementation (in Russian) :

Level of implementation (in Kazakh) :

Efficiency (in Russian) :

Efficiency (in Kazakh) :

Field of application (in Russian) : Область применения: Результаты этой работы будут иметь непосредственное применение в разработке клеточных препаратов в персонализированной медицине.

Field of application (in Kazakh) : Қолдану саласы: Бұл жұмыстың нәтижелері жеке медицинада жасушалық препараттарды әзірлеуде тікелей қолданылады.