The object of research, development or design (in Russian) : Вирус болезни Ньюкасла и его рекомбинантные белки являются основными объектами исследования

The object of research, development or design (in Kazakh) : Ньюкасл аурыны вирусы және оның рекомбинантты ақуыздары зерттеудың негізгі нысандары болып табылады

Aim of work (in Russian) : Основной целью проекта является получение рекомбинантных белков вируса болезни Ньюкасла.

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның негізгі мақсаты – Ньюкасл вирусының рекомбинантты ақуыздарын алу.

Методы исследования (на русском) : Исследования проводились с применением современных методов молекулярной биологии, генной инженерии, вирусологии и иммунологии. На основе анализа литературных данных были выбраны наиболее значимые вирусные белки ВБН. Был выбран дизайн экспрессионных кассет и праймеров. Эти целевые гены были успешно амплифицированы при помощи ориентированной транскрипции полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР), используя геномную РНК вируса БН в качестве матрицы. На основе созданных экспрессионных кассет были получены плазмиды для бактериальной экспрессии вирусных белков. Для этого клетки E. coli трансформировали плазмидной ДНК. Проведена экспрессия и очистка рекомбинантных белков ВБН в бактериальные клетки. Плазмидная ДНК была трансформирована в экспрессионный штамм E. coli BL21(DE3) для размножения плазмид. Иммуногенность бактериально-экспрессированных белков ВБН была оценена с использованием лабораторных животных и птиц. Лабораторные животные поставлены на карантин после были иммунизированы очищенным рекомбинантным белком для получения специфических сывороток.

Методы исследования (на казахском) : Зерттеулер молекулалық биологияның, гендік инженерияның, вирусологияның және иммунологияның заманауи әдістерін қолдана отырып жүргізілді. Әдебиетке шолу негізінде ең маңызды Ньюкасл вирусы ақуыздары таңдалды. Экспрессиялық кассеталар мен праймерлердің дизайны таңдалды. Бұл нысана гендер Ньюкасл вирусы геномдық РНҚ-ны шаблон ретінде пайдаланып, тікелей транскрипция-полимеразды тізбекті реакция (RT-PCR) арқылы сәтті күшейтілді. Жасалған экспрессиялық кассеталарды пайдаланып, вирустық ақуыздардың бактериялық экспрессиясы үшін плазмидалар жасалды. E. coli жасушалары плазмидалық ДНҚ-мен трансформацияланды. Бактериялық жасушалардағы рекомбинантты Ньюкасл вирусы ақуыздарының экспрессиясы және тазартылуы жүргізілді. Плазмидалық ДНҚ плазмиданың көбеюі үшін E. coli экспрессия штаммы BL21(DE3)-ке трансформацияланды. Бактериялық экспрессияланған Ньюкасл вирусы ақуыздарының иммуногенділігі зертханалық жануарлар мен құстарды пайдаланып бағаланды. Зертханалық жануарлар мен құстар кейін карантинге жіберілді. Зертханалық жануарлар нақты сарысу алу үшін тазартылған рекомбинантты ақуызбен иммунизация жасалды.

Obtained results and novelty (in Russian) : Полученные результаты Созданы конструкции химерных плазмид для бактериальных экспрессий выбранных генов Завершены работы по клонированию амплифицированных кДНК целевых генов ВБН для последующего клонирования в экспрессирующие плазмиды. Проведена амплификация кДНК целевых генов ВБН согласно карте плазмиды. Полученные ПЦР-продукты очищены и проанализированы методом электрофореза в агарозном геле. Проведено лигирование амплифицированных фрагментов в плазмидный вектор. Проведена экспрессия и очистка рекомбинантных белков ВБН в бактериальные клетки. Плазмидная ДНК была трансформирована в экспрессионный штамм E. coli BL21(DE3) для размножения плазмид. Начаты работы для оценки безопасности, антигенных и иммуногенных свойств бактериально-экспрессированных белков ВБН. Очищенные препараты, рекомбинантные белки проверяются в концентрации и по отношению биологической активности для оценки их безопасности, антигенных и иммуногенных свойств. Научно-исследовательские работы продолжаются. Новизной проекта является, что впервые в Республике Казахстан будут получены рекомбинантные белки ВБН, что позволит в перспективе разработать высокоэффективные безопасные векторы при производстве и использовании профилактические препараты.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Алынған нәтижелер Таңдалған гендердің бактериялық экспрессиясына арналған химерлі плазмидалық конструкциялар жасалды. Кейіннен экспрессиялық плазмидаға клондау үшін нысаналы Ньюкасл вирусы гендерінің күшейтілген кДНҚ-ларын клондау аяқталды. Нысаналы Ньюкасл вирусы гендерінің (HN, F, M) кДНҚ-сын күшейту плазмидалық картаға сәйкес жүргізілді. Алынған ПТР өнімдері агарозды гель электрофорезі арқылы тазартылып, талданды. Күшейтілген фрагменттер плазмидалық векторға лигирленді. Рекомбинантты Ньюкасл вирусы ақуыздары бактерия жасушаларында экспрессияланып, тазартылды. Плазмидалық ДНҚ плазмиданың көбеюі үшін E. coli BL21(DE3) экспрессиялық штаммына трансформацияланды. Бактериялық экспрессияланған ньюкасла вирусының ақуыздарының қауіпсіздігін, антигендік және иммуногендік қасиеттерін бағалау жұмыстары басталды. Тазартылған препараттар мен рекомбинантты ақуыздар олардың қауіпсіздігін, антигендік және иммуногендік қасиеттерін бағалау үшін концентрациясы мен биологиялық белсенділігіне тексерілуде. Ғылыми зерттеу жұмыстары жалғасуда. Жобаның жаңалығы рекомбинантты NDV ақуыздары Қазақстан Республикасында алғаш рет өндірілетіндігінде, бұл сайып келгенде профилактикалық препараттарды өндіру және қолдану үшін жоғары тиімді және қауіпсіз векторларды әзірлеуге мүмкіндік береді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Социальный, экономический, научно-технический эффект заключается в совершенствовании эпидемиологического благополучия страны по социально значимыми заболеваниям

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Әлеуметтік, экономикалық, ғылыми-техникалық әсері - елдің әлеуметтік маңызы бар ауруларға қатысты эпидемиологиялық салауаттылығын арттыру болып табылады

Level of implementation (in Russian) : не внедрена

Level of implementation (in Kazakh) : енгізілмеді

Efficiency (in Russian) : Эффективность исследования заключается в получении безопасного рекомбинантных белков в качестве вектора

Efficiency (in Kazakh) : Зерттеудің тиімділігі - вектор ретінде отандық қауіпсіз рекомбинантты ақуыздар алуда

Field of application (in Russian) : ветеринария

Field of application (in Kazakh) : ветеринария