The object of research, development or design (in Russian) : урацил-ДНК-гликозилаза UDG золотистого стафилоккока

The object of research, development or design (in Kazakh) : алтын стафилококктың UDG урацил-ДНҚ- гликозилазасы

Aim of work (in Russian) : биохимическая характеристика ранее неизученной ДНК-гликозилазы UDG золотистого стафилоккока

Aim of work (in Kazakh) : алтын стафилококктың бұрын зерттелмеген урацил-ДНҚ-гликозилаза биохимиялық сипаттамасы

Методы исследования (на русском) : методы молекулярной биологии и биохимии

Методы исследования (на казахском) : молекулалық биология және биохимия әдістері

Obtained results and novelty (in Russian) : С помощью методов аффинной и анионобменной хроматографии были очищены рекомбинантные белки SaUDG и SaDnaN из культур E.coli Rosetta2(DE3)/ pET11a/SaUDG и E.coli Rosetta2(DE3)/ pET28c/SaDnaN, соответственно. Молекулярная масса полученного белка SaUDG – 24,9 кДа. Выход белка составил 2 мг. Чистота белка составила 98% электрофоретической чистоты. Молекулярной масса рекомбинантного белка SaDnaN- 41,9 кДа, электрофоретическая чистота 95%. Выход белка SaDnaN составил 5 мг. Полученная рекомбинантная ДНК-гликозилаза SaUDG эффективно устраняет урацил из ДНК-дуплекса в следующих условиях: 20 нМоль 5'-TAMRA-U•G, SaUDG (10-200 нМоль), 10 минут, при +37°С в буфере, содержащем 20 мМ Трис-HCl pH 8.0, 1 мМ ЭДТА, 0,1 мг/мл БСА, 1 мМ ДТТ. Совместное инкубирование SaUDG и SaDnaN в реакционной смеси увеличивает эффективность устранения урацила из ДНК-дуплекса U•G. Были определены оптимальные реакционные условия для репарационной активности очищенной ДНК-гликозилазы Udg in vitro: 100 мМ, KCl, pH 8.0, +22°C. Эксперименты для определения оптимальных условий каждого параметра проводили трижды. С помощью нативного электрофореза в акриламидном геле было исследовано образование кольцеобразной димерной формы DnaN, важной для стимулирования ДНК-гликозилазы Udg. Димерная кольцевая структура мигрировала на уровне 60 кДа, тогда как молекулярная масса мономера 41,9 кДа.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Аффинді және анионалмасу хроматографиясы әдістерінің көмегімен E.coli Rosetta2(DE3)/pET11a/SaUDG және E.coli Rosetta2(DE3)/pET28c/SaDnaN культураларынан сәйкесінше рекомбинантты SaUDG және SaDnaN ақуыздары тазартылды. Алынған SaUDG ақуызының молекулалық массасы – 24,9 кДа. Ақуыздың шығымы 2 мг болды. Ақуыздың тазалығы электрофоретикалық түрде 98% құрады. Рекомбинантты SaDnaN ақуызының молекулалық массасы – 41,9 кДа, электрофоретикалық тазалығы 95%. SaDnaN ақуызының шығымы 5 мг болды. Алынған рекомбинантты ДНҚ-гликозилаза SaUDG келесі жағдайларда ДНҚ-дуплекстен урацылды тиімді түрде шығарады: 20 нмоль 5'-TAMRA-U•G, SaUDG (10–200 нмоль), 10 минут, +37°C температурада, құрамында 20 мМ Tris-HCl pH 8.0, 1 мМ ЭДТА, 0,1 мг/мл BSA, 1 мМ DTT бар буферде. SaUDG және SaDnaN ақуыздарының реакциялық қоспада бірге инкубациялануы U•G ДНҚ-дуплексіндегі урацылды шығару тиімділігін арттырады. Тазартылған Udg ДНҚ-гликозилазасының in vitro репарациялық белсенділігі үшін оңтайлы реакциялық жағдайлар анықталды: 100 мМ KCl, pH 8.0, +22°C. Әр параметрдің оңтайлы жағдайларын анықтау үшін жүргізілген тәжірибелер үш рет қайталанды. Акриламидті гельдегі нативті электрофорез әдісі арқылы Udg ДНҚ-гликозилазасын ынталандыру үшін маңызды DnaN ақуызының сақина тәрізді димерлік формасының түзілуі зерттелді. Димерлі сақиналы құрылым 60 кДа деңгейінде миграциялаған, ал мономердің молекулалық массасы 41,9 кДа болды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : -----

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : -----

Level of implementation (in Russian) :

Level of implementation (in Kazakh) :

Efficiency (in Russian) :

Efficiency (in Kazakh) :

Field of application (in Russian) : Фундаментальные знания

Field of application (in Kazakh) : Іргелі білім