The object of research, development or design (in Russian) : Бактерии Salmonella enterica

The object of research, development or design (in Kazakh) : Salmonella enterica бактериялары

Aim of work (in Russian) : Создание штаммов E. coli, продуцирующих рекомбинантный белок бактерий рода Salmonella. Наработка и очистка рекомбинантных белков, использование для иммунизации лабораторных животных

Aim of work (in Kazakh) : Salmonella туысына жататын бактериялардың рекомбинантты ақуыздарын синтездейтін E. coli штаммдарын алу. Рекомбинантты ақуыздарды өндіру және тазалау, сондай-ақ оларды зертханалық жануарларды иммунизациялау үшін пайдалану

Методы исследования (на русском) : молекулярно-генетические, иммунологические, серологические

Методы исследования (на казахском) : молекулалық-генетикалық, иммунологиялық, серологиялық

Obtained results and novelty (in Russian) : Получен штамм E.coli, продуцент рекомбинантного белка бактерии рода Salmonella. Фрагмент гена IpaJ S.еnterica кодоноптимизирован для экспрессии в E. сoli и синтезирован методом двухэтапной ПЦР.Последовательность клонирована в промежуточный вектор pGEM-T,секвенирована, вырезана и клонирована в экспрессионный вектор pET28.Полученная рекомбинантная плазмида трансформирована в электрокомпетентные клетки E.coliBL21(DE3) Отобраны положительные колонии и определена экспрессию рекомбинантного белка.Оптимальные параметры культивирования штамм-продуцента:концентрация ИПТГ для экспрессии белка - 0,2 мМ, температура 37°С, время инкубации 6 часов. Полученный штамм продуцируют рекомбинантный белок с массой около 32 кДа.Очистка белка проведена методом металл-аффинной хроматографии на колонках His-TrapHP, концентрация очищенного белка составила от 100 до 1400 мкг/мл, в зависимости от фракции.Анализ аминокислотной последовательности белка IpaJ методом масс-спектрометрии показал, что набор триптических пептидов соответствует белкам S.enterica в базе данных Mascot.Специфичность белка IpaJ доказана взаимодействием с положительной контрольной сывороткой (кратность ОП 3,5) и отсутствием реакции с гетерологичными сыворотками (ОП =0,1). Проведена иммунизация мышей линии Balb/c рекомбинантным антигеном, выделены иммунные спленоциты и проведена их гибридизация с клетками миеломной линии.Отобрано 2-х наиболее активных гибридных клона, продуцирующих антитела к эпитопам антигена IpaJ S. enterica.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Алынған E. coli штаммы – Salmonella туысына жататын рекомбинантты ақуыздың продуценті. S. enterica IpaJ генінің фрагменті E. coli-де экспрессиялану үшін кодондық оптимизациядан өтіп, екі сатылы ПТР әдісімен синтезделді. Тізбек аралық pGEM-T векторына клондалып, секвенирленіп, кейін экспрессиялық pET28 векторына енгізілді. Алынған рекомбинантты плазмида E. coli BL21(DE3) электрокомпетентті жасушаларына трансформацияланды. Позитивті колониялар іріктеліп, ақуыз экспрессиясы анықталды. Оптималды шарттар: ИПТГ 0,2 мМ, температура 37°С, инкубация 6 сағат. Ақуыздың молекулалық массасы шамамен 32 кДа. Рекомбинантты ақуыз His-Trap HP колонкалары арқылы металл-аффиндік хроматография әдісімен тазаланды, концентрациясы фракцияға байланысты 100–1400 мкг/мл аралығында болды. Масс-спектрометриялық талдау көрсеткендей, IpaJ ақуызының триптикалық пептидтері Mascot деректер базасындағы Salmonella enterica ақуыздарымен толық сәйкес келді. Ақуыздың спецификалығы оң бақылау сарысумен (ОП 3,5) расталып, гетерологты сарысулармен (ОП 0,1) еш реакция байқалмады. Balb/c тышқандарын рекомбинантты антигендермен иммунизациялап, иммундық көкбауыры бөлініп, олар миелома жасушаларымен гибридизацияланды. Нәтижесінде IpaJ антигенінің эпитоптарына қарсы антиденелерді өндіретін ең белсенді 2 гибридтік клон іріктелді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Получен штамм продуцент E. coli, продуцент рекомбинантного белка IpaJ S. еnterica

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Алынған штамм E. coli продуценті, арнайы IpaJ S. enterica рекомбинантты ақуызының жоғары тиімділікті синтезін қамтамасыз ететін өндірістік штамм.

Level of implementation (in Russian) : не внедрено

Level of implementation (in Kazakh) : енгізілген жоқ

Efficiency (in Russian) : Получен рекомбинантный белок IpaJ S. еnterica, обладающий высокой специфичностью

Efficiency (in Kazakh) : Алынған рекомбинантты IpaJ S. enterica ақуызы жоғары спецификалық қасиетке ие.

Field of application (in Russian) : ветеринарная диагностика

Field of application (in Kazakh) : ветеринариялық диагностика