Inventory number IRN Number of state registration
0324РК01007 AP23490794-KC-24 0124РК00953
Document type Terms of distribution Availability of implementation
Краткие сведения At a negotiated price Number of implementation: 0
Not implemented
Publications
Native publications: 0
International publications: 0 Publications Web of science: 0 Publications Scopus: 0
Patents Amount of funding Code of the program
0 34000000 AP23490794
Name of work
Изучение распространенности популяций возбудителей сальмонеллеза и энтеровирусной инфекций с разработкой диагностических тест-систем на основе ПЦР для совершенствования эпидемиологического мониторинга
Type of work Source of funding Report authors
Fundamental Абдирасилова Айгуль Акзамовна
0
1
2
0
Customer МНВО РК
Information on the executing organization
Short name of the ministry (establishment) МЗ РК
Full name of the service recipient
Национальный научный центр особо опасных инфекций имени Масгута Айкимбаева
Abbreviated name of the service recipient ННЦООИ
Abstract

Типичные штаммы Salmonellа, вида S.enterica, серовариантов S.typhi, S. Paratyphi A, S.enteritidis, S. Typhimurium (всего 50 штаммов) и 10 штаммов вида S. Bongori, изолированные в разные годы в различных регионах Республики Казахстан.

S. enterica түрінің 50 Salmonella штаммдары (S. typhi, S. paratyphi A, S. Enteritidis, S. typhimurium сероварианттары) және Қазақстан Республикасының әртүрлі өңірлерінде әртүрлі жылдары оқшауланған S. Bongori түрінің 10 штаммы таңдалды.

Совершенствование мониторинга популяций сальмонелл и энтеровирусов на территории Казахстана путем разработки высокоспецифичных диагностических тест-систем на основе метода ПЦР в реальном времени для экспрессного определения этиологической причины вспышек сальмонеллезных и энтеровирусных инфекций с целью проведения адекватных и оперативных противоэпидемических мероприятий.

Жедел эпидемияға қарсы іс-шараларды жүргізу мақсатында сальмонеллез және энтеровирустық инфекциялардың өршуінің этиологиялық себебін жедел анықтау үшін нақты уақыттағы ПТР әдісі негізінде жоғары спецификалық диагностикалық тест-жүйелерді әзірлеу арқылы Қазақстан аумағында сальмонеллалар мен энтеровирустар популяцияларының мониторингін жетілдіру.

Молекулярно-генетический анализ патогенов – генотипирование и сиквенс-анализ, ПЦР РВ, MLVA типирования, эпидемиологические, микробиологические исследования, биоинформационный анализ, ГИС-технологии.

Патогендердің молекулалық-генетикалық талдауы – генотиптеу және сиквенс-талдау, НУ-ПТР, MLVA типтеу, эпидемиологиялық, микробиологиялық зерттеулер, биоақпараттық талдау, ГИС-технология.

Проведен сбор и анализ информации по определению уровня изученности генома сальмонелл и энтеровирусов. Идентифицировано более 2600 сероваров, основными возбудителями вспышек являются S. enterica сероваров Typhimurium и Enteritidis. Анализ геномного пейзажа 2023 года выявил превалирование антибиотикоустойчивых штаммов сальмонеллеза. Из лаборатории национальной коллекции микроорганизмов ННЦООИ были отобраны типичные штаммы Salmonellа, всего 50 штаммов. Экстракция геномной ДНК осуществляли с помощью набора QIAamp DNA Mini Kit. Выделенные образцы ДНК сальмонелл далее использовали для проведение молекулярного типирования, также в качестве матрицы для апробации праймеров и ПЦР тест-систем в процессе разработки. Для проведения внутривидовой дифференциации сальмонелл был использован метод молекулярного генотипирования - протокол MLVA5, основанный на пяти VNTR локусах (STTR3, STTR5, STTR6, STTR9 и STTR10), предложенный в 2003 году Линдстедтом и его коллегами. В работе для определения VNTR профилей сальмонелл нами были отобраны 30 образцов ДНК вида S. enterica и 10 вида S. bongori. Методом мультиплексной ПЦР было начато исследование тандемных повторов с переменным числом (VNTR). Для точного определения размера продуктов ПЦР VNTR на приборе SegStudio использован капиллярный электрофорез в присутствии размерного стандарта Liz600.

Сальмонеллалар мен энтеровирустардың геномын зерттеу деңгейін анықтау бойынша ақпарат жиналып, талданды. 2600-ден астам сероварлар анықталды, індеттің негізгі қоздырғыштары Typhimurium және Enteritidis сероварларының S. enterica болып табылады. 2023 жылғы геномдық ландшафтты талдау сальмонеллездің антибиотикке төзімді штаммдарының басым болуын анықтады. АҚИҰҒО микроорганизмдердің ұлттық коллекциясының зертханасынан S. enterica түрінің барлығы 50 Salmonella штаммдары таңдалды. Геномдық ДНҚ экстракциясы QIAamp DNA Mini Kit көмегімен жүзеге асырылды. Бөлінген сальмонелла ДНҚ сынамалары молекулалық типтеу жүргізу, сондай-ақ праймерлер мен ПТР тест-жүйесін әзірлеу процесі кезінде үлгі ретінде пайдаланылды. Сальмонеллалардың түрішілік дифференциациясын жүргізу мақсатында 2003 жылы Линдстедт және оның әріптестері ұсынған бес VNTR локустарына (STTR3, STTR5, STTR6, STTR9 және STTR10) негізделген молекулалық генотиптеу әдісі қолданылды. Сальмонеллалардың VNTR профильдерін анықтау үшін біз S. enterica түрінің 30 және S. bongori түрінің 10 ДНҚ сынамаларын таңдадық. Мультиплексті ПТР әдісімен айнымалы санды тандемді қайталауды (VNTR) зерттеу басталды. SegStudio құрылғысында ПТР өнімдерінің мөлшерін дәл анықтау мақсатында Liz600 өлшемдік стандартының қатысуымен капиллярлық электрофорез қолданылды.

Выполнение работы на разных этапах реализации проекта: отбор штаммов, культивирование возбудителей сальмонеллеза в BSL-2, получение микробной массы, экстракция и измерение концентрации ДНК, микробиологические исследования биологического материала и изолированных штаммов, генетические исследования (ПЦР, генотипирование, SNP, полногеномное секвенирование) с проведением биоинформационного анализа, разработка, синтез праймеров, на основе разработанных праймеров и зондов конструирование ПЦР-тест-системы.

Жобаны іске асырудың әртүрлі кезеңдерінде жұмысты орындау: штаммдарды іріктеу, BSL-2-де сальмонеллез қоздырғыштарын өсіру, микробтық массаны алу, ДНҚ бөлу және концентрациясын өлшеу, биологиялық материалды және оқшауланған штаммдарды микробиологиялық зерттеу, биоақпараттық талдау жүргізе отырып генетикалық зерттеулер (ПТР, генотиптеу, SNP, толық геномды секвенирлеу), праймерлерді әзірлеу, синтездеу, әзірленген праймерлер мен зондтардың негізінде ПТР-тест жүйесін жобалау.

Разработана тест-система для выявления сальмонелл вида Salmonella enterica, включая сальмонеллы редких групп, на основе мультиплексной ПЦР-РВ.

Мультиплексті НУ-ПТР негізінде Salmonella enterica түрінің сальмонеллаларын, соның ішінде сирек кездесетін топтардың сальмонеллаларын анықтауға арналған тест-жүйе әзірленді.

Получены положительные результаты апробации сконструированной ПЦР тест-системы для выявления сальмонелл вида Salmonella enterica.

Salmonella enterica түрінің сальмонеллаларын анықтауға арналған әзірленген ПТР тест-жүйе апробацияның оң нәтижелері алынды.

Целевые потребители ПЦР тест-систем – учреждения противочумной, санитарно-эпидемиологической, ветеринарной служб, лаборатории поликлиник, инфекционных стационаров, профильные научные учреждения.

ПТР тест-жүйелерінің мақсатты тұтынушылары – обаға қарсы күрес станциялары, санитариялық-эпидемиологиялық, ветеринариялық қызметтер мекемелері, емханалар зертханалары, инфекциялық стационарлар, профильді ғылыми мекемелер.

UDC indices
61:575
International classifier codes
76.03.39;
Key words in Russian
сальмонеллез; энтеровирусы; патоген; генотипирование; разработка ПЦР РВ тест-системы; генетическая идентификация; диагностика; секвенирование;
Key words in Kazakh
сальмонеллез; энтеровирустар; патоген; генотиптеу; НУ ПТР тест-жүйесін әзірлеу; генетикалық идентификация; диагностика; секвенирлеу;
Head of the organization Жумадилова Зауреш Бапановна Кандидат медицинских наук / Нет
Head of work Абдирасилова Айгуль Акзамовна Кандидат медицинских наук / Нет