The object of research, development or design (in Russian) : урацил-ДНК-гликозилаза UDG золотистого стафилоккока

The object of research, development or design (in Kazakh) : Алтын стафилококктың UDG урацил-ДНҚ- гликозилазасы

Aim of work (in Russian) : биохимическая характеристика ранее неизученной ДНК-гликозилазы UDG золотистого стафилоккока

Aim of work (in Kazakh) : алтын стафилококктың бұрын зерттелмеген урацил-ДНҚ-гликозилаза биохимиялық сипаттамасы

Методы исследования (на русском) : методы молекулярной биологии и биохимии

Методы исследования (на казахском) : молекулалық биология және биохимия әдістері

Obtained results and novelty (in Russian) : Из геномной ДНК S. aureus были амплифицированы гены udg (657 п.н.) и dnaN (1134 п.н.). Полученные гены были клонированы в промежуточный вектор pGEM-T для хранения, в результате были получены векторы pGEM-T/SaUDG и pGEM-T/SaDnaN. Для последующей хроматографической очистки были сконструированы экспрессионные векторы pET11a/SaUDG и pET28c/SaDnaN. Вектор pET11a/SaUDG позволяет получить рекомбинантный фермент SaUDG в нативной форме, а вектор pET28c/SaDnaN – рекомбинантный белок SaDnaN с шестигистидоновой меткой на N-конце для эффективной очистки с помощью аффинной хроматографии. Полученные рекомбинантные векторы были секвенированы методом Сэнгера: мутации и нарушения открытой рамки считывания не обнаружены. Были подобраны оптимальные условия для максимального выхода рекомбинантных белков Udg и DnaN (наиболее эффективный штамм-продуцент Escherichia coli, время и температура индукции, концентрация изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида). Для сравнения эффективности экспрессии генов udg и dnaN были использованы штаммы Escherichia coli ArcticExpress (DE3), BL-21 (DE3) и Rosetta2 (DE3). Наибольшее накопление рекомбинатных белков Udg и DnaN в водорастворимой фракции клеточного лизата наблюдалось в штамме Rosetta2 (DE3). Оптимальные условия индукции рекомбинантных белков Udg и DnaN: температура индукции +22°С, время культивирования 16 часов, концентрация изопропил-β-D-1 тиогалактопиранозида 0,5 мМ.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : S. aureus геномдық ДНҚ-сынан udg (657 н.ж.) және dnaN (1134 н.ж.) гендері амплификацияланды. Алынған гендер сақтау мақсатында pGEM-T аралық векторына клондалды, нәтижесінде pGEM-T/SaUDG және pGEM-T/SaDnaN векторлары алынды. Кейінгі хроматографиялық тазарту үшін pET11a/SaUDG және pET28c/SaDnaN экспрессия векторлары құрастырылды. pET11a/SaUDG векторы рекомбинантты SaUDG ферментін табиғи түрінде қамтамасыз етеді, ал pET28c/SaDnaN векторы аффинділік хроматографиясы арқылы тиімді тазарту үшін N-терминалындағы алты гистидин белгісі бар рекомбинантты SaDnaN ақуызын қамтамасыз етеді. Алынған рекомбинантты векторлар Сэнгер әдісімен реттелген: мутация немесе ашық оқу шеңберінің бұзылуы анықталған жоқ. Udg және DnaN рекомбинантты ақуыздарының максималды шығымдылығына қол жеткізу үшін оңтайлы жағдайлар анықталды (Escherichia coli-нің ең тиімді өндіруші штаммы, индукция уақыты мен температурасы, изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид концентрациясы). udg және dnaN гендерінің экспрессиясының тиімділігін салыстыру үшін Escherichia coli ArcticExpress (DE3), BL-21 (DE3) және Rosetta2 (DE3) штаммдары қолданылды. Жасуша лизатының суда еритін фракциясында рекомбинантты ақуыздардың Udg және DnaN ең жоғары жинақталуы Rosetta2 (DE3) штаммында байқалды. Udg және DnaN рекомбинантты ақуыздарын индукциялау үшін оптималды жағдайлар: индукция температурасы +22°C, өсіру уақыты 16 сағат, изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид концентрациясы 0,5 мМ.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : ---

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : ---

Level of implementation (in Russian) :

Level of implementation (in Kazakh) :

Efficiency (in Russian) :

Efficiency (in Kazakh) :

Field of application (in Russian) : Фундаментальные знания

Field of application (in Kazakh) : Іргелі білім