Inventory number IRN Number of state registration
0324РК00641 AP19676555-KC-24 0123РК00790
Document type Terms of distribution Availability of implementation
Краткие сведения Gratis Number of implementation: 0
Not implemented
Publications
Native publications: 0
International publications: 0 Publications Web of science: 0 Publications Scopus: 0
Patents Amount of funding Code of the program
0 35341189 AP19676555
Name of work
Разработка и оценка иммуноферментного анализа на основе химерного рекомбинантного белка внутриклеточного паразита Toxoplasma gondii
Type of work Source of funding Report authors
Applied Турсунов Канат Ахметович
0
0
0
0
Customer МНВО РК
Information on the executing organization
Short name of the ministry (establishment) МНВО РК
Full name of the service recipient
Товарищество с ограниченной ответственностью "Национальный центр биотехнологии"
Abbreviated name of the service recipient ТОО "Национальный центр биотехнологии"
Abstract

Объектом исследования является иммуноферментный анализ для диагностики токсоплазмоза коров, овец и коз.

Зерттеу объектісі сиырлар, қойлар мен ешкілердегі токсоплазмозды диагностикалауға арналған иммуноферменттік талдау болып табылады.

Целью исследований на 2024 год является изучение биохимических свойств рекомбинантного химерного антигена T. gondii и оптимизация основных параметров иммуноферментного анализа.

2024 жылға арналған зерттеулердің мақсаты рекомбинантты химерлік антигенінің T. gondii биохимиялық қасиеттерін зерттеу және иммуноферменттік талдаудың негізгі параметрлерін оңтайландыру болып табылады.

В ходе выполнения задач проекта использовались генно-инженерные, биотехнологические и иммунологические методы исследования.

Жобаның тапсырмаларын орындау барысында биохимиялық, иммунологиялық және серологиялық зерттеу әдістері қолданылды.

Анализ аминокислотной последовательности белка Tg1 достоверно показал, что набор триптических пептидов STAAVILTPTENHFTLK, AVTLSSLIPEAEDSWWTGDSASLDTAGIK, FPVTTQTFVVGCIK соответствует белкам T. gondii представленным в базе данных Mascot (максимальный Score - 7858). Анализ аминокислотной последовательности белков Tg2 и Tg3 также показал их принадлежность к белкам T. gondii. Score для этих белков составил 1046 и 998, соответственно. Методом иммуноблота установлено, что белки Tg1 и Tg2 вступают в реакцию с положительной контрольной сывороткой и не реагируют с отрицательным контролем. При этом белок Tg3 не вступает в реакцию с контролями. При изучении методом дот-ИФА, использовали концентрацию белков от 1000 мкг/мл до 10 мкг/мл. Установлено, что белки Tg1 и Tg2 вступают в реакцию с контрольной положительной сывороткой при концентрации 100 мкг/мл и 400 мкг/мл, соответственно. При отработке основных параметров ИФА установлено, что наиболее оптимальная концентрация Tg1 и Tg2 белков для иммобилизации на планшет составляет 0,5-1 мкг/мл. Инкубация в течение 16-18 часов при 37ºС. для блокировки использовали 1% бычий сывороточный альбумин. Разведение вторичных антител составило 1:10000. При концентрации белка 1 мкг/мл и разведении контрольных сывороток от 1:20 до 1:160, кратность между К+ и К- варьировала в пределах 10,2-11,7 для Tg1 и 6,4-7,2 для Tg2. При концентрации белка 0,5 мкг/мл, кратность варьировала в пределах 7,8-10,6 для Tg1 и 4,3-5,2 для Tg2.

Tg1 ақуызының аминқышқылдарының тізбегін талдау STAAVILTPTENHFTLK, AVTLSSLIPEAEDSWWTGDSASLDTAGIK, FPVTTQTFVVGCIK триптикалық пептидтер жиынтығы Mascot дерекқорында ұсынылған T. gondii ақуыздарына сәйкес келетінін сенімді түрде көрсетті (максималды Score - 7858). Tg2 және Tg3 ақуыздарының аминқышқылдарының тізбегін талдау олардың T. gondii ақуыздарына жататындығын көрсетті. Бұл ақуыздар үшін Score сәйкесінше 1046 және 998 болды. Иммуноблот әдісімен Tg1 және Tg2 ақуыздары оң бақылау сарысуымен әрекеттесетіні және теріс бақылаумен жауап бермейтіні анықталды. Бұл жағдайда Tg3 ақуызы бақылаулармен әрекеттеспейді. Дот- ИФТ әдісімен зерттегенде 1000 мкг/мл-ден 10 мкг/мл-ге дейінгі ақуыздардың концентрациясы қолданылды. Тиісінше 100 мкг/мл және 400 мкг/мл концентрациясында Тg1 және Тg2 ақуыздары бақылау оң сарысумен әрекеттесетіні анықталды. ИФТ-ның негізгі параметрлерін жетілдіру кезінде планшетке иммобилизациялау үшін Тg1 және Тg2 ақуыздарының ең оңтайлы концентрациясы 0,5-1 мкг/мл құрайды. Бұғаттау үшін 1% сиыр сарысуы альбумині қолданылды. Екіншілік антиденелердің сұйылтуы 1:10000 құрады. 1 мкг/мл ақуыз концентрациясы және 1:20 - дан 1:160-қа дейінгі бақылау сарысуларын сұйылту кезінде К+ және К- арасындағы еселік Тгg үшін 10,2-11,7 және Тg2 үшін 6,4-7,2 шегінде өзгерді. Ақуыз концентрациясы 0,5 мкг/мл болғанда, жиілік Тg1 үшін 7,8-10,6 және Тg2 үшін 4,3-5,2 аралығында өзгерді.

Результаты иммуноблота и ИФА показали высокую специфичность и эффективность рекомбинантных антигенов для диагностики токсоплазмоза животных

Иммуноблот пен ИФА нәтижелері жануарлардың токсоплазмозын диагностикалау үшін рекомбинантты антигендердің жоғары ерекшелігі мен тиімділігін көрсетті

Проект находится на стадии выполнения

Жоба орындалуда

Эффективность разработки определяется высокой чувствительностью и специфичностью иммуноферментного анализа с контрольными сыворотками

Даму тиімділігі бақылау сарысулары бар иммуноферментті талдаудың жоғары сезімталдығымен және ерекшелігімен анықталады

Ветеринария

Ветеринария

UDC indices
619, 616.993.192.1
International classifier codes
68.41.41;
Key words in Russian
Токсоплазмоз; Диагностика; Химерный антиген; Иммуноферментный анализ; Крупный рогатый скот; Мелкий рогатый скот;
Key words in Kazakh
Токсоплазмоз; Диагностикалау; Химерлі антиген; Байланыстырылған иммуносорбентті талдау; Ірі-қара мал; ұсақ мал;
Head of the organization Огай Вячеслав Борисович Phd / Профессор
Head of work Турсунов Канат Ахметович Phd / нет