The object of research, development or design (in Russian) : KRAS-мутантные раковые клетки.

The object of research, development or design (in Kazakh) : KRAS-мутантты қатерлі ісік жасушалары.

Aim of work (in Russian) : Учитывая измененный метаболизм, который ярко выражен в KRAS-мутантных раковых клетках, мы предлагаем определить их механизмы адаптации и выживания, активируемые в ответ на условия голодания, посредством проведения полисомного профилирования и транскриптомных исследований.

Aim of work (in Kazakh) : KRAS-мутантты қатерлі ісік жасушаларындағы айқын байқалатын өзгертілген метаболизмді ескере отырып, олардың ашығу жағдайларына жауап ретінде белсенетін бейімделу және өмір сүру механизмдерін полисомдық профилирлеу мен транскриптомдық зерттеулер арқылы анықтауды ұсынамыз.

Методы исследования (на русском) : Техники ведения культуры клеток, подсчет количества и размера клеток, клеточный лизис, мягкая обработка ультразвуком, сахарозное градиентное фракционирование с детектированием нуклеиновых кислот рибонуклеопротеиновых комплексов по УФ-поглощению (А254), PEG преципитация рибонуклеопротеиновых комплексов, РНК изолирование с использованием реагента Тризол или набора «mirVana™ miRNA Isolation Kit (Thermo Fisher Scientific)». Проведение контроля качества изолированных РНК. Транскриптомное секвенирование на платформе Иллюмина «Novaseq 6000». Биоинформатический анализ полученных транскриптомов. Валидирование результатов с использованием ингибиторов холестерольного биосинтеза и синтеза жирных кислот. Анализ жизнеспособности клеток с использованием метода проточной цитометрии.

Методы исследования (на казахском) : Жасушаларды өсіру әдістері, жасушалардың санын және өлшемін анықтау, жасушалық лизис, жұмсақ ультрадыбыспен өңдеу, нуклеин қышқылдарын УФ-сіңіру арқылы анықтау (А254) арқылы рибонуклеопротеин кешендерінің сахароза градиентті фракциялануы, рибонуклеопротеин кешендерінің PEG преципитациясы, Тризол реагенті немесе «mirVana™ miRNA Isolation Kit (Thermo Fisher Scientific)» жиынтығын пайдалана отырып РНҚ изоляциялау. Бөлінген РНҚ сапасын бақылау. Иллюмина «Novaseq 6000» платформасында транскриптомдық секвенирлеу. Алынған транскриптомдарды биоақпараттық талдау. Холестерин және май қышқылдары биосинтезінің ингибиторларын пайдалана отырып, нәтижелерді валидациялау. Протоктық цитометрия әдісі арқылы жасушалардың өміршеңдігін талдау.

Obtained results and novelty (in Russian) : Мы сравнили две клеточные линии (Н1299 и MDA-MB-231) с использованием методов градиентного фракционирования и транскриптомного анализа. Мы сравнили клеточный рост в Н1299 клетках при данных условиях после 24 ч и 48 ч с использованием оборудования Multisizer 4e (Beckman Coulter) и обнаружили статистически значимую разницу между Контролем (клетки, растущие в полной среде), -АА (в среде без аминокислот), -Глюк. (в среде без глюкозы). Однако анализ проточной цитометрии показал, что клетки во всех условиях были живые. Далее мы провели ряд экспериментов для определения синтеза 80S рибосомы и полисом с использованием сахарозного градиентного фракционирования (BioComp Instruments (Fredericton, Canada)). Мы наблюдали, что лишение раковых клеток сыворотки в течение 24 часов не оказало никакого влияния на профилирование рибосом, а также на формирование прерибосомных комплексов. Лишение аминокислот или глюкозы в течение того же времени приводило к существенному снижению полисомальных фракций и увеличению пика, соответствующего рибосомальной частице 80S. Условия недостатка аминокислот также привели к образованию небольших прерибосомальных комплексов, что наблюдалось по снижению пиков IPRibs. Данные профилирования указывают на то, что раковые клетки после 24-часовой депривации сыворотки сохраняют высокую способность к синтезу белка, поскольку их полисомальные пики сопоставимы с пиками, обнаруженными в раковых клетках, активно растущих в присутствии сыворотки.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Біз градиентті фракциялау және транскриптомдық талдау әдістерін пайдалана отырып, екі жасуша желісін (Н1299 және MDA-MB-231) салыстырдық. Multisizer 4e (Beckman Coulter) жабдығын пайдаланып, осы жағдайларда Н1299 жасушаларының 24 сағат және 48 сағаттан кейінгі жасушалық өсуін салыстырып, толық ортада (Контроль), -АА (аминқышқылсыз ортада), -Глюк. (глюкозасыз ортада) өсірілген жасушалар арасында статистикалық маңызды айырмашылықты анықтадық. Дегенмен, ағындық цитометрия талдауы барлық жағдайлардағы жасушалардың тірі екенін көрсетті. Содан кейін біз 80S рибосомалар және полисомдар синтезін анықтау үшін (BioComp Instruments, Fredericton, Канада) сахароза градиентті фракциялау әдістерін қолдандық. Сарысудан айырылған қатерлі ісік жасушаларының 24 сағат ішінде рибосома профиліне және прерибосомдық кешендердің түзілуіне әсер етпегенін байқадық. Аминқышқылдар немесе глюкоза тапшылығы сол уақыт ішінде полисомдық фракциялардың едәуір төмендеуіне және 80S рибосомалық бөлшекке сәйкес келетін шыңның артуына әкелді. Аминқышқылдар тапшылығы жағдайлары да кішігірім прерибосомдық кешендердің түзілуіне алып келді, бұл IPRibs шыңдарының төмендеуі арқылы байқалды. Профильдеу деректері 24 сағаттық сарысудан айырылғаннан кейін қатерлі ісік жасушалары ақуыз синтезін жоғары деңгейде сақтайтынын, өйткені олардың полисомдық шыңдары сарысу қатысында белсенді өсіп жатқан қатерлі ісік жасушаларында байқалған шыңдармен салыстырмалы екенін көрсетті.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : То, как высокозлокачественные KRAS-мутантные раковые клетки адаптируются в среде, лишенной питательных веществ, приведет к пониманию механизмов выживания раковых клеток, управляемых высокоэффективным онкогеном. Фундаментальные исследования по характеристике выживаемости раковых клеток будут способствовать эффективным стратегиям разработки лекарств от рака и улучшения лечения рака.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : KRAS-мутантты қатерлі ісік жасушаларының қоректік заттардан жұрдай ортада қалай бейімделетіні қатерлі ісік жасушаларының тіршілік ету механизмдерін түсінуге әкеледі, бұл жоғары тиімді онкогенмен басқарылатын. Қатерлі ісік жасушаларының тіршілік етуін сипаттайтын негізгі зерттеулер ракқа қарсы дәрі-дәрмектерді тиімді әзірлеу стратегияларын жақсартуға және рак ауруын емдеуді жетілдіруге көмектеседі.

Level of implementation (in Russian) : Начальный этап, закупка реагентов, оптимизация экспериментов, настройка экспериментальных моделей, предварительные результаты.

Level of implementation (in Kazakh) : Бастапқы кезең: реагенттерді сатып алу, эксперименттерді оңтайландыру, эксперименттік модельдерді орнату, бастапқы нәтижелер.

Efficiency (in Russian) : Эффективность данного проекта отразится в повышении эффективности лечения KRAS-мутантных онкологий. Учитывая высокую стрессоустойчивость опухолевых клеток с мутацией KRAS к дефициту питательных веществ крайне важно понять и изучить механизмы, обеспечивающие их выживание в условиях голодания и стресса. Понимание механизмов выживания раковых клеток с мутацией KRAS в условиях голодания будет способствовать выявлению новых мишеней рака и разработке мощных цитотоксических терапевтических агентов, эффективных для подавления рака с мутацией KRAS.

Efficiency (in Kazakh) : Бұл жобаның тиімділігі KRAS-мутантты онкологияларды емдеудің тиімділігін арттырумен көрсетіледі. KRAS мутациясымен зақымдалған ісік жасушаларының қоректік заттардың жетіспеушілігіне жоғары стресске қарсы тұруы жағдайында, олардың ашығу және стресс жағдайларында тіршілік ету механизмдерін түсіну мен зерттеу өте маңызды. KRAS мутациясы бар қатерлі ісік жасушаларының ашығу жағдайларындағы тіршілік ету механизмдерін түсіну жаңа рак мишенелерін анықтауға және KRAS мутациясымен белсенді түрде күресу үшін тиімді цитотоксикалық терапевтік агенттерді әзірлеуге көмектеседі.

Field of application (in Russian) : Фундаментальная наука.

Field of application (in Kazakh) : Фундаменталдық ғылым.