The object of research, development or design (in Russian) : Нанотела

The object of research, development or design (in Kazakh) : Нанодене

Aim of work (in Russian) : Разработка новых нанотел для эффективной нейтрализации вируса бешенства (RABV). Разработка высокоспецифичного и чувствительного зонда на основе нанотел для быстрого обнаружения RABV в иммуноанализах.

Aim of work (in Kazakh) : RABV-ді тиімді бейтараптандыру үшін жаңа наноденелерді әзірлеу. RABV-ді иммундық талдауларда жылдам анықтауға арналған наноденеге негізделген жоғары спецификалық және сезімтал зондты әзірлеу.

Методы исследования (на русском) : Выделение и клонирование генов, ОТ, ПЦР, ИФА, рестрикция, гель электрофорезы, аффинная хроматография, получение и очистка антител, Вестерн блоттинг.

Методы исследования (на казахском) : Гендерді бөліп алу және клондау, КТ, ПТР, ИФА, рестрикция, гель электрофорездер, аффинді хроматография, антиденелерді алу және тазарту, Вестерн блоттинг.

Obtained results and novelty (in Russian) : Система экспрессии клеток E.coli SHuffle использовалась для экспрессии эктодомена G белка бешенства (rRABV-GE) отдельно и слитого с доменом тримеризации человеческого коллагена XVIII (rRABV-G-XVIII). Показано, что стабилизированный тример rRABV-G-XVIII демонстрирует повышенную антигенсвязывающую специфичность по сравнению с немодифицированным rRABV-GE. Сконструированы фаговые библиотеки VHH против вируса бешенства путем иммунизации здорового верблюда с rRABV-G-XVIII. После серий биопэннинга и скрининга были получены пять анти-rRABV-G-XVIII нанотел (Nbs) с большой разницей в области CDR3. Мы сконструировали двухвалентные димерные и трехвалентные Nbs с доменом XVIII (TIEXVIII). Моно-, ди- и тримерные Nbs продемонстрировали сильную специфичность связывания с иммобилизованным целым инактивированным RABV. Показано, что мультимерные Nbs обеспечивают 100% защиту мышей, инфицированных летальными дозами вируса бешенства in vivo. Результаты показывают, что тримерные Nbs могут быть ценными диагностическими инструментами и возможными противовирусными кандидатами для лечения инфекции RABV. Разработан чувствительный и одноэтапный ИФА с использованием Nbs слитых с щелочной фосфатазой. Нанотела обладают огромным потенциалом для применения в диагностике, терапии и медицине. Для внедрения результатов НИР требуется доклинические и клинические испытания. Терапия на основе Nbs, которая дешевле в производстве, чем традиционные моноклональные антитела, может снизить расходы на лечение бешенства.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : E.coli SHuffle жасушалық экспрессия жүйесі құтыру ақуызының (rRABV-GE) эктодоменін және адам коллагенінің XVIII (rRABV-G-XVIII) тримерлеу доменімен біріктірілген rRABV-GE ақуызын экспрессиялау үшін пайдаланылды. Тұрақтандырылған RABV-G-XVIII триммері модификацияланбаған rRABV-GE-мен салыстырғанда антигенді байланысудың жоғары спецификалылығын көрсетті. Біз rRABV-G-XVIII белогының көмегімен сау екі түйені иммундау арқылы құтыру вирусына қарсы VHH фагтық кітапханасын жасадық. Биопэннинг пен скрининг сериясынан кейін бес анти-rRABV-G-XVIII наноденелері (Nbs) алынды, олардың CDR3 аймағында үлкен айырмашылық бар. Екі валентті димерлі және XVIII (TIEXVIII) домені бар үш валентті наноденелер құрастырылды. Моно-, ди- және тримерлі наноденелер иммобилизацияланған тұтас инактивацияланған RABV байланысудың жоғарғы спецификалылығын көрсетті. Сондай-ақ, мультимерлі наноденелердің in vivo жағдайында құтыру вирусының өлімге әкелетін дозаларын жұқтырған тышқандарды 100% қорғауды қамтамасыз етті. Құтыруды диагностикалау үшін нанодене мен сілтілі фосфатазаның қосылуынан құралған белокты қолдана отырып, сезімтал және бір сатылы ИФА жасалынды. Наноантиденелер диагностикада, терапияда және медицинада қолдану үшін орасан зор әлеуетке ие. Зерттеу жұмысының нәтижелерін енгізу үшін клиникаға дейінгі және клиникалық сынақтар қажет. Дәстүрлі моноклоналды антиденелерге қарағанда өндіруі арзан наноденеге негізделген терапия құтыруды емдеуге кететін шығынды азайтуы мүмкін.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Выполнен комплекс исследований по разработке технологии получения рекомбинантных нанотел специфичных к вирусу бешенства. В результате был отобран высокоаффинный клон наноантител, показавший 100% нейтрализующую активность in vivo при заражении мышей летальными дозами вируса бешенства. Полученные данные указывают на возможность создания высокоэффективных препаратов на основе однодоменных антител для терапии бешенства. Терапия на основе нанотел, которая дешевле в производстве, чем традиционные моноклональные антитела, может снизить расходы на лечение бешенства.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Құтыру вирусына қарсы рекомбинантты наноантиденелерді өндіру технологиясын әзірлеу үшін бірқатар зерттеулер жүргізілді. Нәтижесінде құтыру вирусының леталды дозасымен жұқтырылған тышқандарды in vivo жағдайда 100% вирусты бейтараптандыру белсенділігі тән наноантиденелердің жоғары аффинді клоны таңдалды. Алынған деректер құтыруды емдеуге арналған бір доменді антиденелер негізінде тиімділігі жоғары препараттарды құру мүмкіндігін көрсетеді. Дәстүрлі моноклоналды антиденелерге қарағанда өндіруі арзан наноантиденеге негізделген терапия құтыруды емдеуге кететін шығынды азайтуы мүмкін.

Level of implementation (in Russian) : Нет.

Level of implementation (in Kazakh) : Жоқ.

Efficiency (in Russian) : Запланированные работы выполнены полностью. G-белок вируса бешенства в виде правильно уложенного рекомбинантного белка успешно экспрессирован в E. coli SHuffle системе. Конструированы библиотеки кДНК-VHH (нанотела) методом фагового дисплея и проведена селекция RABV-G-специфических нанотел. Проведена характеристика нанотел как реагентов для выявления RABV, а также их эффективности в нейтрализации вируса бешенства in vivo. Разработан одноэтапный-вариант иммуноферментного анализа для диагностики бешенства на основе нанотел к гликопротеину вируса бешенства.

Efficiency (in Kazakh) : Жоспарланған жұмыстар толық көлемде орындалды. Құтыру вирусының G протеині дұрыс конформациялы рекомбинантты белок ретінде E. coli SHuffle жүйесінде сәтті экспрессияланды. VHH кДНҚ кітапханалары (наноантиденелер) фагтар дисплейі әдісімен құрастырылды және құтыру вирус белогына спецификалық наноантиденелерге таңдау жүргізілді. Наноантиденелер құтыру вирусын анықтауға арналған реагенттер ретінде, сондай-ақ олардың in vivo жағдайда құтыру вирусын бейтараптандырудағы тиімділігі сипатталды. Құтыру вирусының гликопротеиніне спецификалық наноантиденелер негізінде құтыруды диагностикалау үшін иммуноферментті талдаудың бір сатылы нұсқасы әзірленді.

Field of application (in Russian) : Разработанные нанотела рекомендуется для применения в диагностике, для профилактики и терапии бешенства.

Field of application (in Kazakh) : Жасалған наноантиденелер құтыру ауруының диагностикасы, алдын алу және терапиясында қолдануға ұсынылады.