The object of research, development or design (in Russian) : Проект посвящен использованию рецептора NKG2D в составе химерных антигенных рецепторов для усиления противоопухолевой активности Т-клеток при лечении колоректального рака (CRC). Исследуются генно-инженерные методы повышения эффективности инфильтрации и цитотоксического воздействия CAR-T клеток на раковые клетки CRC.

The object of research, development or design (in Kazakh) : Жоба колоректальды қатерлі ісікті (CRC) емдеуде Т жасушаларының ісікке қарсы белсенділігін арттыру үшін химерлік антигендік рецепторлардың бөлігі ретінде NKG2D рецепторын қолдануға арналған. CAR-T жасушаларының CRC рак жасушаларына инфильтрация тиімділігін жəне цитотоксикалық əсерін арттырудың гендік-инженерлік əдістерін зерттейді.

Aim of work (in Russian) : Улучшение терапии солидных опухолей, в частности колоректального рака, путем разработки NKG2D-опосредованной CAR-T терапии, способной к высокоэффективной инфильтрации и уничтожению раковых клеток, а также преодолению иммуносупрессивного микроокружения опухоли.

Aim of work (in Kazakh) : Жоғары тиімді инфильтрацияға жəне рак жасушаларын жоюға, ісіктің иммуносупрессивті микроортасын жеңуге қабілетті NKG2D-делдалдық CAR T терапиясын əзірлеу арқылы қатты ісік терапиясын, атап айтқанда колоректальды қатерлі ісік терапиясын жақсарту.

Методы исследования (на русском) : В дополнение к стандартной вирусной трансдукции, используется электропорация для доставки мРНК, кодирующих NKG2D и хемокины CXCL9 и CXCL10, в Т-клетки. Для оценки цитотоксической активности CAR-T клеток используются ко-культуры с колоректальными опухолевыми клетками в различных соотношениях эффектор/мишень, мониторинг клеточной гибели опухолевых клеток с помощью системы RTCA (Real-Time Cell Analysis). С помощью флуоресцентно-меченных антител и проточной цитометрии анализируется экспрессия NKG2D на поверхности CAR-T клеток и уровни экспрессии маркеров активации, таких как CD69 и IFN-γ. Проточная цитометрия также используется для оценки жизнеспособности, пролиферации и цитотоксического потенциала CAR-T клеток. Вестерн-блоттинг используется для детекции экспрессии рецепторов к IFN-γ и TNF-α на поверхности опухолевых клеток. Этот метод позволяет определить возможные причины устойчивости или чувствительности клеточных линий CRC к цитокиновому воздействию, что важно для последующего выбора оптимальных доз CAR-T клеток. Проводится qPCR для количественного анализа уровня экспрессии генов, связанных с рецепторами и лигандами NKG2D, а также генов, кодирующих ключевые хемокины. Это позволяет уточнить статус раковых клеток CRC и их чувствительность к воздействию CAR-T терапии, что важно для понимания механизмов устойчивости и эффективного целенаправленного лечения.

Методы исследования (на казахском) : Стандартты вирустық трансдукциядан басқа, NKG2D жəне CXCL9 жəне CXCL10 химокиндерін кодтайтын мРНҚ-ны Т жасушаларына жеткізу үшін электропорация қолданылады. CAR-T жасушаларының цитотоксикалық белсенділігін бағалау үшін RTCA (Real-Time Cell Analysis) жүйесі арқылы ісік жасушаларының жасушалық өлімін бақылау, әртүрлі эффектор/мақсатты арақатынаста колоректальды ісік жасушалары бар ко-культуралар қолданылады. Флуоресцентті таңбаланған антиденелер мен ағындық цитометрия арқылы CAR-T жасушаларының бетіндегі NKG2D экспрессиясы жəне СD69 жəне IFN-γ сияқты белсендіру маркерлерінің экспрессия деңгейлері талданады. Ағынды цитометрия сонымен қатар CAR-T жасушаларының өміршеңдігін, көбеюін жəне цитотоксикалық потенциалын бағалау үшін қолданылады. Western Blot ісік жасушаларының бетіндегі IFN-γ жəне TNF-α рецепторларының экспрессиясын анықтау үшін қолданылады. Бұл əдіс CRC жасуша желісін цитокиндік əсерге төзімділігінің немесе сезімталдығының ықтимал себептерін анықтауға мүмкіндік береді, бұл CAR-T жасушаларының оңтайлы дозаларын кейіннен таңдау үшін маңызды. qPCR NKG2D рецепторлары мен лигандаларымен байланысты гендердің, негізгі химокиндерді кодтайтын гендердің экспрессия деңгейін сандық талдау үшін жүргізіледі. Бұл CRC рак жасушаларының күйін жəне олардың CAR-T терапиясының əсеріне сезімталдығын нақтылауға мүмкіндік береді, бұл төзімділік механизмдерін жəне тиімді мақсатты емдеуді түсіну үшін маңызды.

Obtained results and novelty (in Russian) : В рамках исследования предложен инновационный подход к усилению противоопухолевой активности CAR-T клеток за счет одновременной экспрессии химерного антигенного рецептора NKG2D и хемокинов CXCL9/CXCL10. Основной гипотезой проекта является то, что совместная экспрессия NKG2D и хемокинов способствует активной инфильтрации CAR-T клеток в опухолевую ткань и повышению их эффективности в уничтожении раковых клеток колоректального рака (CRC). Первоначальные эксперименты продемонстрировали, что все исследуемые клеточные линии CRC экспрессируют лиганды для NKG2D, и эти лиганды активируются при воздействии генотоксических агентов (например, оксалиплатина и 5-фторурацила). Кроме того, клеточные линии CRC проявляют различную степень чувствительности к IFN-γ и TNF-α, что, как показали результаты вестерн- блоттинга, связано с уровнем экспрессии рецепторов для этих цитокинов. Это открытие является ключевым для выбора оптимальных доз CAR-T клеток и для понимания механизмов устойчивости опухоли к цитокиновому лизису. Новизна проекта заключается в подходе к одновременной экспрессии NKG2D и хемокинов для повышения способности CAR-T клеток инфильтрировать опухолевую ткань. Такой подход может повысить терапевтический потенциал CAR-T клеток при лечении солидных опухолей и сформировать базу для разработки методов иммунной терапии, способной преодолеть иммунологическое «холодное» окружение опухоли.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Зерттеу NKG2D химерлі антигендік рецепторы мен CXCL9/CXCL10 химокиндерін бір мезгілде экспрессиялау арқылы CAR-T жасушаларының ісікке қарсы белсенділігін арттыруға инновациялық тəсілді ұсынды. Жобаның негізгі гипотезасы NKG2D жəне химокиндердің бірлескен экспрессиясы CAR-T жасушаларының ісік тініне белсенді инфильтрациясына жəне олардың колоректальды қатерлі ісік жасушаларын (CRC) өлтірудегі тиімділігін арттыруға ықпал етеді. Бастапқы тəжірибелер барлық зерттелетін CRC жасушалық желілері NKG2D үшін лигандаларды экспрессиялайтынын көрсетті жəне бұл лигандалар генотоксикалық агенттерге (мысалы, оксалиплатин жəне 5-Фторурацил) əсер еткенде белсендіріледі. Сонымен қатар, CRC жасушалық желілері IFN-γ жəне TNF-α - ға əртүрлі сезімталдық дəрежесін көрсетеді, бұл Western Blotting нəтижелері осы цитокиндердің рецепторлық экспрессия деңгейіне байланысты екенін көрсетті. Бұл нəтиже CAR T жасушаларының оңтайлы дозаларын таңдау жəне ісіктің цитокиндік лизиске төзімділік механизмдерін түсіну үшін маңызды. Жобаның жаңалығы CAR-T жасушаларының ісік тінін инфильтрациялау қабілетін арттыру үшін NKG2D жəне химокиндерді бір уақытта экспрессиялау тəсілінде жатыр. Ұсынылған əдіс CAR-T жасушаларының жоғары тұрақтылығы мен тиімділігін қамтамасыз ететін вирустық трансдукцияға қауіпсіз балама болып табылады. Бұл тəсіл солидті ісіктерді емдеуде CAR-T жасушаларының емдік потенциалын арттырып, ісіктің иммунологиялық "суық" ортасын жеңе алатын иммундық терапия əдістерін əзірлеу үшін негіз құра алады.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Применение комбинированной экспрессии NKG2D и хемокинов может привести к улучшению показателей выживаемости и снижению затрат на лечение за счет повышения эффективности CAR-T терапии и уменьшения необходимости в высоких дозах клеток и химиотерапевтических препаратов.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : NKG2D жəне химокиндердің біріктірілген экспрессиясын қолдану CAR-T терапиясының тиімділігін арттыру жəне жасушалар мен химиотерапиялық препараттардың жоғары дозаларына қажеттілікті азайту арқылы өмір сүру көрсеткіштерінің жақсаруына жəне емдеу шығындарының төмендеуіне əкелуі мүмкін.

Level of implementation (in Russian) : Не внедрено.

Level of implementation (in Kazakh) : Енгізілген жоқ.

Efficiency (in Russian) : В рамках данного проекта с помощью генно-инженерных и молекулярно-клеточных подходов предполагается повысить эффективность эрадикации клеток CRC с помощью NKG2D-экспрессирующих иммунных цитотоксических Т-клеток. Данные, полученные в ходе выполнения проекта, позволят оценить эффективность и цитотоксическую активность получаемых NKG2D-клеток в сочетании с CXC хемокинами и их применимость в лечении иммунологически различных типов колоректального рака.

Efficiency (in Kazakh) : Осы жоба шеңберінде гендік-инженерлік және молекулалық-жасушалық тәсілдер арқылы NKG2D-экспрессиялайтын иммундық цитотоксикалық Т-жасушалары арқылы CRC жасушаларының эрадикациясының тиімділігін арттыру көзделеді. Жобаны орындау барысында алынған деректер CXC химокиндерімен біріктірілген алынған NKG2D жасушаларының тиімділігі мен цитотоксикалық белсенділігін және олардың иммунологиялық тұрғыдан әртүрлі колоректальды қатерлі ісік түрлерін емдеуде қолданылуын бағалауға мүмкіндік береді.

Field of application (in Russian) : Разработанные методы в будущем могут быть применены в терапии онкологических заболеваний, особенно для лечения солидных опухолей, таких как колоректальный рак, которые демонстрируют низкую чувствительность к традиционным методам лечения.

Field of application (in Kazakh) : Болашақта əзірленген əдістерді қатерлі ісік терапиясында, əсіресе дəстүрлі емдеу əдістеріне төмен сезімталдықты көрсететін колоректальды қатерлі ісік сияқты солидті ісіктерді емдеу үшін қолдануға болады.