The object of research, development or design (in Russian) : Верблюжий химозин

The object of research, development or design (in Kazakh) : Түйе химосині

Aim of work (in Russian) : Изучение коагуляционной, пептидазной и протеолитической активности верблюжьего химозина из Camelus bactrianus на кобыльем молоке и разработкой технологии глубокой переработки кобыльего молока в новые инновационные продукты.

Aim of work (in Kazakh) : Бие сүтіндегі Camelus bactrianus түйе химозинінің коагуляциялық, пептидазалық және протеолитикалық белсенділігін зерттеу және бие сүтін терең өңдеу арқылы жаңа инновациялық өнім алу технологиясын әзірлеу.

Методы исследования (на русском) : Молекулярная биология, биохимия, биотехнология

Методы исследования (на казахском) : Молекулярная биология, биохимия, биотехнология

Obtained results and novelty (in Russian) : Проведена наработка дрожжевого штамма-продуцента верблюжьего химозина методом глубинной ферментации в биореакторе объемом 50 литров в течение 144 часов. Рекомбинантный химозин в количестве 38 г очищали ионообменной хроматографией, стерилизовали и лиофилизировали. Молокосвертывающая активность рекомбинантного химозина составила 36000 Ед/г. Из геномной ДНК тимуса теленка клонирован фрагмент (четвертый экзон гена) κ-казеина молока, который был клонирован в составе плазмиды pParallel2. В результате получена генно-инженерная конструкция Parallel2/k-CN, несущая фрагменты κ-казеина молока Bos taurus. Вектором Parallel2/k-CN были трансформированы клетки E. coli BL21(DE3) и проведено внутриклеточное накопление рекомбинантного белка MBP-k-CN. Выделение и очистку MBP-k-CN из клеток E. coli проводили аффинной хроматографией на колонке MBPTrap. Выход рекомбинантного белка составил 12 мг с 1 литра культуры. Рекомбинантный субстрат биотинилировали и анализировали вестерн-блоттингом. Изучено влияние температуры реакции в диапазоне от 0°C до 75°C и рН субстрата в диапазоне от 2,0 до 9,0 на пептидазную активность рекомбинантного химозина Camelus bactrianus. Изучено влияние ионов 11 металлов на скорость реакции химозина. Проведено выделение казеинов из коровьего молока и определена протеолитическая активность верблюжьего химозина на α-, β-, и κ-казеинах, и БСА и γ-глобулине.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : 144 Сағат ішінде көлемі 50 литр биореакторда терең ашыту әдісімен түйе химозинінің ашытқы-продуцент штаммы әзірленді. 38 г мөлшеріндегі рекомбинантты химозин ион алмасу хроматографиясымен тазартылды, зарарсыздандырылды және лиофилизацияланды. Рекомбинантты химозиннің сүт ұю белсенділігі 36000 бірлік/г құрады. Бұзау тимусының геномдық ДНҚ-сынан pParallel2 плазмидасында клондалған κ-казеин сүтінің фрагменті (геннің төртінші экзоны) клондалған. Нәтижесінде Bos taurus сүті κ-казеинінің фрагменттерін тасымалдайтын Parallel2/k-CN гендік-инженерлік конструкция алынды. Parallel 2/kCN векторы E. coli bl21(DE3) жасушаларын өзгертті және MBP-k-CN рекомбинантты ақуызының жасушаішілік жинақталуы жүргізілді. E. coli жасушаларынан MBP-kCN оқшаулау және тазарту MBPTrap бағанында аффиндік хроматография арқылы жүргізілді. Рекомбинантты ақуыздың өнімділігі 1 литр дақылға 12 мг құрады. Рекомбинантты субстрат биотинилденіп, вестерн блоттингпен талданды. Рекомбинантты химозин Camelus bactrianus пептидаза белсенділігіне 0°C-тан 75°C-қа дейінгі диапазондағы реакция температурасының және 2,0-ден 9,0-ге дейінгі диапазондағы субстраттың рН әсері зерттелді. 11 металл иондарының химозиннің реакция жылдамдығына әсері зерттелді. Сиыр сүтінен казеиндер бөлінді, α -, β -, κ-казеиндердегі, BSA және γ-глобулиндегі түйе химозинінің протеолитикалық белсенділігі, анықталды.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Наработан рекомбинантный верблюжий химозин в количестве 32 грамма, получена 1 плазмидная конструкция и получен 1 рекомбинантный субстрат.

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : 32 грамм мөлшерінде рекомбинантты түйе химозині әзірленді, 1 плазмидтік құрылым алынды және 1 рекомбинантты субстрат алынды.

Level of implementation (in Russian) : Нет

Level of implementation (in Kazakh) : Жоқ

Efficiency (in Russian) : Высокая

Efficiency (in Kazakh) : Жоғары

Field of application (in Russian) : Биотехнология

Field of application (in Kazakh) : Биотехнология