The object of research, development or design (in Russian) : Объектами исследования являются ферменты репарации ДНК TagA M. tuberculosis и Ung H. pylori

The object of research, development or design (in Kazakh) : Зерттеу объектілері - M. tuberculosis-тің TagA және H. pylori-дің Ung ДНҚ жөндеу ферменттері.

Aim of work (in Russian) : Цель проекта - структурно-функциональное исследование активности ранее не изученных ферментов репарации ДНК человеческих патогенов M. tuberculosis и H. pylori

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның мақсаты – адам туберкулезі M.tuberculosis және H.pylori қоздырғыштарының бұрын зерттелмеген ДНҚ жөндеу ферменттерінің белсенділігін құрылымдық-функционалдық зерттеу.

Методы исследования (на русском) : Методы проведения работы - методы молекулярной биологии и биохимии

Методы исследования (на казахском) : Жұмыс әдістері – молекулалық биология және биохимия әдістері

Obtained results and novelty (in Russian) : Получены генетические конструкции pGEM-T/MtbTagA, pGEM-T/HpUNG, pET28c/MtbTagA, pET28c/HpUNG. Оптимизированы условия экспрессии генов рекомбинантными штаммами Arctic Express (DE3)/pET28c(+)/MtbTagA и Arctic Express (DE3)/pET28c(+)/HpUNG. С помощью двуступенчатой аффинной хроматографии получены рекомбинантные белки с 95% электрофоретической чистотой. MtbTagA образует никированную плазмиду после метилирования ДНК. Оптимальные условия для HpUNG: 20 мМ Трис-HCl pH 8,0, 1 мМ ЭДТА, 0,1 мг/мл БСА, 1 мМ ДТТ, +37°C. HpUNG эффективно устраняет урацил: Vmax 0,6178 нМ×мин-1, KM 12,15 нМ. После гомологичного моделирования были получены мутанты HpUNG N136D и HpUNG H200Q. Показано, что замены N136D и H200Q приводят к снижению и полной потере активности, что подтверждает консервативность и важную роль данных аминокислот в гомологичных урацил-ДНК-гликозилазах. Экспрессия генов ферментов MtbTagA и HpUNG в мутантных клетках E. coli обеспечивает устойчивость при генотоксичных условиях.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : pGEM-T/MtbTagA, pGEM-T/HpUNG, pET28c/MtbTagA, pET28c/HpUNG генетикалық құрылымдары алынды. Ген экспрессиясының шарттары Arctic Express (DE3)/pET28c(+)/MtbTagA және Arctic Express (DE3)/pET28c(+)/HpUNG рекомбинантты штаммдары үшін оңтайландырылған. Екі сатылы аффинді хроматография көмегімен 95% электрофоретикалық тазалығы бар рекомбинантты ақуыздар алынды. MtbTagA ДНҚ метилденуінен кейін никтелген плазмида түзеді. HpUNG үшін оңтайлы шарттар: 20 мМ Tris-HCl pH 8,0, 1 мМ EDTA, 0,1 мг/мл BSA, 1 мМ DTT, +37°C. HpUNG урацилді тиімді жояды: Vmax 0,6178 nM×min-1, KM 12,15 nM. Гомологиялық модельдеуден кейін HpUNG N136D және HpUNG H200Q мутанттары алынды. N136D және H200Q алмастырулары белсенділіктің төмендеуіне және толық жоғалуына әкелетіні көрсетілді, бұл осы аминқышқылдарының гомологты урацил-ДНҚ гликозилазаларында сақталуы мен маңызды рөлін растайды. Мутантты E. coli жасушаларында MtbTagA және HpUNG фермент гендерінің экспрессиясы генотоксикалық жағдайларда төзімділікті қамтамасыз етеді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : -

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : -

Level of implementation (in Russian) : -

Level of implementation (in Kazakh) : -

Efficiency (in Russian) : -

Efficiency (in Kazakh) : -

Field of application (in Russian) : Фундаментальные знания

Field of application (in Kazakh) : Негізгі білім