The object of research, development or design (in Russian) : Образцы венозной крови пациентов с различными заболеваниями сердца (кардиомиопатиями, аритмиями различного генеза).

The object of research, development or design (in Kazakh) : Әртүрлі жүрек аурулары бар науқастардан веноздық қан үлгілері (кардиомиопатиялар, әртүрлі шыққан аритмиялар

Aim of work (in Russian) : Создать экспериментальную модель известной патогенной мутации гена hRYR2, связанной с первичным электрическим расстройством сердца: модель клеток кардиомиоцитов, полученных из стволовых клеток человека, и провести функциональные исследования.

Aim of work (in Kazakh) : Жүректің біріншілік электрлік ауруымен байланысты hRYR2 генінің белгілі патогенді мутациясының эксперименттік моделін жасау: адамның дің жасушаларынан алынған кардиомиоцит жасушаларының үлгісін жасау және функционалдық зерттеулер жүргізу

Методы исследования (на русском) : Для выполнения задач настоящего проекта за отчетный период проводился сбор венозной крови на базе ННКЦ пациентов с различными типами аритмий, молекулярно-генетическая характеристика и оценка генотипа на основе таргетной кардиопанели. Проведено пилотное исследование по получению индуцированных плюрипотентных стволовых клеток из соматических клеток на основе вируса Сендай.

Методы исследования (на казахском) : Аталған жоба міндеттерін орындау үшін есеп беру кезеңінде Ұлттық ғылыми кардиохирургия орталығында жүрек әртүрлі аритмия түрлерімен ауыратын науқастардан веноздық қан алынды, молекулярлық-генетикалық сипаттамалар және генетикалык кардиологиялық панель негізінде генотипті бағалау жүргізілді. Сендай вирусына негізделген соматикалық жасушалардан индукцияланған плюрипотентті дің жасушаларын алу үшін пилоттық зерттеу жүргізілді.

Obtained results and novelty (in Russian) : Было проведено выделение мононуклерных клеток (МНК) на основе протокола Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich). МНК выделяли из стабилизированной гепарином крови на одноступенчатом градиенте, после трехратной промывки (1%, pencilinum- streptomicynum, 10% FBS, RPMI). начата апробация протокола репрограммирования на основе CytoTune™-iPS 2 Sendai Reprogramming Kit. Для воспроизведения в кардиомиоцитах (hiPSC-CM) была выбрана новая мутация RYR2 c13892AT (p.D4631V) с неясной функциональной значимостью, выявленная ранее в наше выборке казахстанских пациентов. Наиболее воспроизводимой системой для функциональных исследований является patch-clamp система Axopatch 200B Amplifier (Molecular Devices LLP.), включающая программный пакет для анализа результатов Таким образом разработанная модель будет на следующих этапах исследования использоваться для функциональной оценки патогенности генетического варианта с неясной значимостью (VUS), выявленных у казахстанских пациентов с различными нарушениями ритма (LQTS, BrS).

Obtained results and novelty (in Kazakh) : ИПДЖ (индукцияланған плюрипотентті дің жасушаларын) құру екі көзден жүзеге асырылуы мүмкін: тері фибробласттары және қанның мононуклеарлы жасушалары. Біз оның ішінде шартты сау адамнан веноздық қан үлгілерін таңдадық. Мононуклеарлы жасушалар (МНЖ) Histopaque®-1077 (Sigma-Аldrich) протоколы арқылы бөліп шығарылды. МНЖ бір сатылы градиент арқылы гепаринмен тұрақтандырылған қаннан бөлініп алынды; үш рет жуудан кейін (1%, pencilinum- streptomicynum, 10% FBS, RPMI) Содан кейін соматикалық жасушалардан ИПДЖ (индукцияланған плюрипотентті дің жасушаларын) жасау үшін қол жетімді протоколдар талданды. Сынақ үшін Epstein-Bar вирусына негізделген және Сендай вирусына негізделген екі протокол таңдалды. Кардиомиоциттерде (hiPSC-CM) жаңғырту үшін біздің қазақстандық пациенттердің үлгісінде бұрын анықталған, функционалдық мәні анық емес жаңа RYR2 c13892AT (p.D4631V) мутациясы таңдалды. Функционалдық зерттеулерге арналған ең қайталанатын жүйе - нәтижелерді талдауға арналған бағдарламалық пакетті қамтитын Axopatch 200B Amplifier patch-clamp жүйесі болып табылады (Molecular Devices LLP.). Осылайша, әзірленген модель зерттеудің келесі кезеңдерінде әртүрлі ырғақ бұзылыстары бар (LQTS, BrS) қазақстандық пациенттерде анықталған анық емес генетикалық нұсқаның (VUS) патогенділігін функционалдық бағалау үшін пайдаланылатын болады.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : В целом поступило 5 пациентов со следующими клиническими диагнозами: синдром удлинения QT, тахикардия, синдром Джервелла и Ланге-Нильсен, двусторонняя тугоухость 4 степени, диффузный зоб 2 степени. Возрастной интервал пациентов составил 2 - 34 года. Из них 3 пациента женского пола, остальные мужского пола. Также проведен ревизинг участников исследования с выявленными ранее мутациями. Для воспроизведения в кардиомиоцитах (hiPSC-CM) была выбрана новая мутация RYR2 c13892AT (p.D4631V) с неясной функциональной значимостью, выявленная ранее в наше выборке казахстанских пациентов

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Осы тапсырмаға сәйкес, есепті кезеңде «ҰҒКО» АҚ базасында жаңа зерттеуге қатысушыларды іріктеу және биоматериал (веноздық қан) алу жүргізілді. Жалпы алғанда келесі диагноздармен 5 науқас түсті: ұзақ QT синдромы, тахикардия, Джервелл және Ланге-Нильсен синдромы, 4-дәрежелі есту қабілетінің екі жақты төмендеуі, 2-дәрежелі диффузды зоб . Науқастардың жас аралығы 2 - 34 жас болды. Оның арасында 3 әйел, қалғаны ер адамдар. Сонымен қатар, бұрын анықталған мутациялары бар зерттеуге қатысушылардың қайта қаралуы де жүргізілді. Кардиомиоциттерде (hiPSC-CM) жаңғырту үшін біздің қазақстандық пациенттердің үлгісінде бұрын анықталған, функционалдық мәні анық емес жаңа RYR2 c13892AT (p.D4631V) мутациясы таңдалды.

Level of implementation (in Russian) : Не предусмотрено

Level of implementation (in Kazakh) : Енгізілмеген

Efficiency (in Russian) : Молекулярно-генетические методы исследования (таргетное секвенирование, получение плюрипотентных стволовых клеток из соматических клеток пациента) являются полезными инструментами для определения функциональной значимости впервые выявленных мутаций и позволяют лучше понять фундаментальные основы развития аритмии, оценить вклад мутаций в фенотип заболевания (клиническое течение).

Efficiency (in Kazakh) : Молекулалық-генетикалық зерттеу әдістері (мақсатты секвенирлеу, пациенттің соматикалық жасушаларынан плюрипотентті дің жасушаларын алу) жаңадан анықталған мутациялардың функционалдық маңыздылығын анықтаудың пайдалы құралы болып табылады және аритмияның дамуының іргелі принциптерін түсінуге және мутациялардың мутацияға қосқан үлесін бағалауға аурудың фенотип (клиникалық ағымы) мүмкіндік береді.

Field of application (in Russian) : Медицина (кардиология), молекулярная биология

Field of application (in Kazakh) : Медицина (кардиология), және молекулалық биология