The object of research, development or design (in Russian) : Фермент системы репарации ДНК

The object of research, development or design (in Kazakh) : ДНҚ жөндеу фермент

Aim of work (in Russian) : Целью Проекта является биохимическая характеристика ранее неизученного фермента репарации ДНК – NucS Mycobacterium tuberculosis

Aim of work (in Kazakh) : Жобаның мақсаты бұрын зерттелмеген Mycobacterium tuberculosis NucS ДНҚ қалпына келтіру ферментінің биохимиялық сипаттамасы болып табылады

Методы исследования (на русском) : Методы молекулярной биологии и биохимии

Методы исследования (на казахском) : Молекулярлық биология және биохимия әдістері

Obtained results and novelty (in Russian) : Проведено клонирование гена эндонуклеазы NucS (MtbNucS) в экспрессирующие вектора pET-28c(+) и pMBP-parallel 2. Проведено клонирование гена эндонуклеазы NucS в экспрессирующий вектор pMBP-parallel 2. Проведено клонирование гена бета-субъединицы ДНК полимеразы III (бета-клампа) в вектор pET-28c(+). Полученная генетическая конструкция позволяет получить рекомбинантный белок с дополнительной гексагистидиновой меткой. Полученные рекомбинантные вектора были просеквенированы с помощью метода Сэнгера. Все генетические конструкции были проверены на предмет содержания мутаций, последовательности открытых рамок считывания. Проведена оптимизация экспрессии рекомбинантных белков MtbNucS и MtbDnaN. Были использованы следующие штаммы Eschericha coli - ArcticExpress (DE3), BL21 (DE3) и Rosetta(DE3). Наибольшей экспрессией обладали штаммы ArcticExpress (DE3) и BL21 (DE3). Оптимальными условиями индукции рекомбинантных белков были следующими – температура 22°С, время культивирования 16 ч., концентрация изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида 0,2 мМ. Проведена наработка клеточной биомассы, лизис и хроматографическая очистка рекомбинантных белков MtbNucS и MtbDnaN. Клеточную биомассу нарабатывали в объеме 1-2 л среды LB с соответствующим антибиотиком. Проведена очистка рекомбинантных белков MtbNucS и MtbDnaN с использованием хроматографических колонок HisTrap HP и MBPTrap HP. Высокую степень очистки подтверждали электрофорезом белков в полиакриламидном геле, чистота составила >90%.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : NucS эндонуклеаза гені (MtbNucS) pET-28c(+) және pMBP-параллель 2 экспрессия векторларына клондалған NucS эндонуклеаза гені pMBP-параллель 2 экспрессия векторына клондалған. ДНҚ-полимераза III (бета қысқыш) бета суббірлігіне арналған ген pET-28c(+) векторына клондалған. Алынған генетикалық құрылым қосымша гексахистидин тегі бар рекомбинантты ақуызды алуға мүмкіндік береді. Алынған рекомбинантты векторлар Сэнгер әдісі арқылы реттелген. Барлық генетикалық құрылымдар мутация мазмұны мен ашық оқу кадр тізбегі үшін тексерілді. MtbNucS және MtbDnaN рекомбинантты ақуыздарының экспрессиясы оңтайландырылды. Келесі Eschericha coli штамдары қолданылды - ArcticExpress (DE3), BL21 (DE3) және Rosetta (DE3). ArcticExpress (DE3) және BL21 (DE3) штаммдары ең жоғары өрнекке ие болды. Рекомбинантты ақуыздарды индукциялау үшін оңтайлы жағдайлар келесідей болды: температура 22°С, өсіру уақыты 16 сағат, изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид концентрациясы 0,2 мМ. Жасуша биомассасын алу, лизис және MtbNucS және MtbDnaN рекомбинантты ақуыздарды хроматографиялық тазарту жүргізілді. Жасушалық биомасса тиісті антибиотикпен LB ортасының 1-2 л көлемінде өндірілді. MtbNucS және MtbDnaN рекомбинантты ақуыздары HisTrap HP және MBPTrap HP хроматографиялық бағандары арқылы тазартылды. Тазартудың жоғары дәрежесі полиакриламидті гельдегі ақуыз электрофорезі арқылы расталды, тазалығы >90% құрады.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : -

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : -

Level of implementation (in Russian) : -

Level of implementation (in Kazakh) : -

Efficiency (in Russian) : -

Efficiency (in Kazakh) : -

Field of application (in Russian) : Фундаментальные знания

Field of application (in Kazakh) : Негізгі білім