The object of research, development or design (in Russian) : Arabidopsis thaliana, кДНК AtRPS6A и AtRPS6B.

The object of research, development or design (in Kazakh) : Arabidopsis thaliana, AtRPS6A және AtRPS6B кДНҚ.

Aim of work (in Russian) : Цель - разработать научные основы биотехнологии получения генетически модифицированных (ГМ) растений картофеля (Solanum tuberosum) с повышенной скоростью роста и созревания на основе экспрессии фосфомиметически мутированных кДНК-генов рибосомного белка S6 из A. thaliana (AtRPS6A и AtRPS6B).

Aim of work (in Kazakh) : Мақсаты – A. thaliana рибосомалық S6 белоктардың (AtRPS6A және AtRPS6B) фосфомиметикалық мутацияланған кДНҚ гендерінің экспрессиясына негізделген өсу және жетілу қарқыны жоғары генетикалық түрлендірілген (ГM) картоп (Solanum tuberosum) өсімдіктерін өндіру биотехнологиясының ғылыми негіздерін жасау.

Методы исследования (на русском) : Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей, выделение РНК, обратная транскрипция, ПЦР, электрофорез нуклеиновых кислот, секвенирование ДНК по Сэнгеру, методы молекулярного клонирования, электрофорез белков, иммуноблоттинг, аффинная хроматография, металлоионная хроматография, вакуумная инфильтрация, спектрофотометрический анализ нуклеиновых кислот и белков, статистический анализ данных.

Методы исследования (на казахском) : Нуклеотидтер тізбегін компьютерлік талдау, РНҚ оқшаулау, кері транскрипция, ПТР, нуклеин қышқылының электрофорезі, ДНҚ Сэнгер секвенирлеу, молекулалық клондау әдістері, белоктардың электрофорезі, иммуноблоттау, жақындық хроматографиясы, металл иондарының хроматографиясы, вакуумдық инфильтрация, нуклеин қышқылдары мен белоктардың спектрофотометриялық талдауы, статистикалық мәліметтерді талдау.

Obtained results and novelty (in Russian) : Синтезированы, очищены и сконцентрированные рекомбинантные белки: His-AtRPS6A(S231E,S237E,S240E,S241E,S247E,T249E) и His-AtRPS6B(S231E,S237E,S240E,S241E). Сконструированы генетические конструкции: 35S-AtRPS6A(S231E,S237E,S240E,S241E,S247E,T249E)-Nos_pCambia2300 и 35S-AtRPS6B(S231E,S237E,S240E,S241E)-Nos_pCambia2300.- Мутированные кДНК экспрессированы в клетках бактерий, методом иммуноблоттинга подтвержден синтез кодируемых ими белков. Проведена очистка рекомбинантных белков His-AtRPS6A(S231E,S237E,S240E,S241E,S247E,T249E) и His-AtRPS6B(S231E,S237E,S240E,S241E) методом хроматографии IMAC. Очищенные рекомбинантные белки сконцентрированы посредством центрифугирования в концентрирующих колонках. Целостность белков подтверждена иммуноблоттингом. - Варианты кДНК-генов AtRPS6A и AtRPS6B c фосфомиметическими заменами встроены в агробактериальный бинарный вектор. Функциональные участки обеих ДНК-конструкций выверены секвенированием. Наработаны миди-препараты сконструированных ДНК-конструкций. - Проведена временная экспрессия трансгенов в растениях для функционального подтверждения их способности экспрессироваться in vivo. Из подверженных вакуумной инфильтрации растений и контрольных растений, не подверженных инфильтрации, выделены тотальные препараты РНК Тризолом на 3-й, 5-й и 7-й день после инфильтрации. Проведена обратная транскрипция с последующей ПЦР со специфическими праймерами для детекции РНК трансгенов.

Obtained results and novelty (in Kazakh) : Рекомбинантты ақуыздар синтезделді, тазартылды және шоғырландырылды: His-AtRPS6A (S231E, S237E, S240E, S241E, S247E, T249E) және His-AtRPS6B (S231E, S237E, S240E, S241E). Генетикалық конструкциялар құрастырылды: 35S-AtRPS6A(S231E,S237E,S240E,S241E,S247E,T249E)-Nos_pCambia2300 және 35S-AtRPS6B(S231E,S237EC01S2s,S247E01S2s, - Бактерия жасушаларында экспрессияланған ДНҚ-ға мутацияланған, синтезі расталған олар кодтайтын ақуыздарды иммуноблоттау арқылы. His-AtRPS6A(S231E,S237E,S240E,S241E,S247E,T249E) және His-AtRPS6B(S231E,S237E,S240E,S241E) рекомбинантты ақуыздары IMAC хроматографиясы арқылы тазартылды. Тазартылған рекомбинантты ақуыздар концентрлеу колонналарында центрифугалау арқылы концентрленеді. Белоктардың тұтастығы иммуноблотинг арқылы расталды. - Agrobacterium екілік векторында фосфомиметикалық алмастырулары бар cDNA гендерінің AtRPS6A және AtRPS6B нұсқалары салынған. Екі ДНҚ құрылымының функционалды аймақтары секвенирлеу арқылы тексерілді. Инженерлік ДНҚ құрылымдарының миди препараттары әзірленді. - Өсімдіктердегі трансгендердің уақытша экспрессиясы олардың in vivo экспрессиялану қабілетін функционалды түрде растау үшін жүргізілді. Жалпы РНҚ препараттары вакуумдық инфильтрацияға ұшыраған өсімдіктерден және инфильтрациядан кейінгі 3, 5 және 7-ші күні инфильтрацияға ұшырамайтын бақылау өсімдіктерінен Тризолды қолдану арқылы бөлініп алынды. Кері транскрипция, одан кейін трансгендік РНҚ анықтау үшін арнайы праймерлермен ПТР жүргізілді.

The main constructive and technical economic indicators (in Russian) : Синтезированы, очищены и концентрированы рекомбинантные белки: His-AtRPS6A (S231E, S237E, S240E, S241E, S247E, T249E) и His-AtRPS6B (S231E, S237E, S240E, S241E).

The main constructive and technical economic indicators (in Kazakh) : Рекомбинантты ақуыздар синтезделді, тазартылды және шоғырландырылды: His-AtRPS6A (S231E, S237E, S240E, S241E, S247E, T249E) және His-AtRPS6B (S231E, S237E, S240E, S241E).

Level of implementation (in Russian) : Не внедрено.

Level of implementation (in Kazakh) : Орындалмаған.

Efficiency (in Russian) : В ходе временной экспрессии обоих кДНК-генов целевые трансгенные мРНК появлялись на 5-й день после инфильтрации, на 7-й день достигая максимума. Все запланированные работы выполнены в срок.

Efficiency (in Kazakh) : Екі кДНҚ-генінің өтпелі экспрессиясы кезінде мақсатты трансгенді мРНҚ инфильтрациядан кейін 5-ші күні пайда болды, 7-ші күні максимумға жетеді. Барлық жоспарланған жұмыстар белгіленген мерзімде орындалды.

Field of application (in Russian) : Растениеводство, биотехнология растений.

Field of application (in Kazakh) : Өсімдік шаруашылығы, өсімдік биотехнологиясы.